殼聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵、酶解條件研究.pdf

1、甲殼素是自然界僅次于纖維素的第二大可再利用有機(jī)資源，甲殼素脫乙酰后得到殼聚糖，甲殼低聚糖是甲殼素或殼聚糖降解后產(chǎn)生的一類低聚合度、可溶于水的殼寡糖。同甲殼素和殼聚糖相比，甲殼低聚糖具有更好的水溶性和生物相容性，生理特性更加獨(dú)特和優(yōu)越，具有保濕、抑菌、抗腫瘤、提高免疫、調(diào)節(jié)血脂和膽固醇等一系列的生理功能。傳統(tǒng)方法制備甲殼低聚糖存在污染大、能耗高、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等缺點(diǎn)，而酶法制備甲殼低聚糖條件溫和，過程易于控制，對(duì)環(huán)境無污染而成為目前研究的

2、熱點(diǎn)。本論文通過從土壤中篩選分離產(chǎn)殼聚糖降解特效酶的菌株，并對(duì)該菌株產(chǎn)酶及酶解條件進(jìn)行了研究，為酶法制備甲殼低聚糖打下基礎(chǔ)。
　　 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1．采用以殼聚糖為唯一碳源的選擇性平板篩選培養(yǎng)基，從33份土樣中分離篩選得到17株產(chǎn)殼聚糖酶的菌株，對(duì)其中5株透明圈與菌落直徑比值較大的菌進(jìn)行初步鑒定，結(jié)果表明，1株為細(xì)菌，其余4株為放線菌。
　　 2．分別采用細(xì)菌和放線菌較合適的培養(yǎng)基，對(duì)初篩選出的5株菌

3、斜面保藏和搖瓶復(fù)篩，采用DNS法測(cè)定酶活，得到1株產(chǎn)殼聚糖酶能力較強(qiáng)的菌株CJ-1，酶活可達(dá)2.28U/ml。該菌株菌落濕潤，表面有光澤，似蠟燭樣白色。通過生理生化特征，以及16SrDNA序列分析對(duì)其進(jìn)行鑒定，確定該菌屬于蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。
　　 3．實(shí)驗(yàn)表明，CJ-1菌株所產(chǎn)的殼聚糖酶為誘導(dǎo)酶，其最適發(fā)酵培養(yǎng)基為以1％殼聚糖為碳源，牛肉膏為氮源，碳源氮源比例為8:1。作為碳源的殼聚糖脫乙酰度越高，

4、對(duì)發(fā)酵產(chǎn)酶越有利，當(dāng)脫乙酰度高于90％時(shí)，酶活則變化不大。添加表面活性劑可顯著提高酶活，最適的表面活性劑為吐溫60，最適添加量為0.04％。通過響應(yīng)面曲線優(yōu)化后的最佳發(fā)酵產(chǎn)酶工藝條件為溫度38℃，pH6.5，發(fā)酵時(shí)間28h，裝液量36ml，在此條件下，發(fā)酵液的酶活力為3.18U/ml。
　　 4．研究表明，該酶對(duì)溫度不太穩(wěn)定，當(dāng)溫度達(dá)到70℃時(shí)，酶活力損失達(dá)90％。pH對(duì)酶活穩(wěn)定性影響不大，在pH4.5-7.5范圍內(nèi)均比較穩(wěn)定。