超順磁性殼聚糖質(zhì)粒(pDsVEGF165Redl-N1)明膠控釋微球修復(fù)顱骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察振蕩磁場(chǎng)下超順磁性殼聚糖質(zhì)粒(pDsVEGF165Red1-N1)明膠微球(SPCPGM)與磷酸鈣骨水泥復(fù)合的生物材料修復(fù)顱骨缺損的作用,初步探討其成骨效果和臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：(1)制備血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)質(zhì)粒(pDsVEGF165Red1-N1)。用HandⅢ、SacⅡ進(jìn)行雙酶切,然后以瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證。以SmartSpecTM3000核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)量質(zhì)粒濃度和純度。(2)化學(xué)共沉淀法制作超

2、順磁性殼聚糖納米微球(SPFCN),用振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)儀測(cè)定SPFCN的磁性強(qiáng)度。(3)制備超順磁性殼聚糖質(zhì)粒(pDsVEGF165Red1-N1)復(fù)合物(SPCPN)。(4)乳化交聯(lián)法制作超順磁性殼聚糖明膠微球(SPCGM)及超順磁性殼聚糖質(zhì)粒明膠微球(SPCPGM)。將自固化磷酸鈣骨水泥(CPC)與以乳化交聯(lián)法制備的單純明膠微球按7.5％(w/w)比例的混合制備多孔的仿兔顱骨骨缺損的復(fù)合支架,將一定量的SPCPGM和SPCGM微球分別

3、與支架復(fù)合。(5)新西蘭大白兔60只,隨機(jī)分為空白支架組(A組);支架+SPCPGM組(B組);支架+SPCGM+振蕩磁場(chǎng)組(C組);支架+SPCGM組(D組);支架+SPCPGM+振蕩磁場(chǎng)組(E組)。分別于術(shù)后2周、4周、8周、12周通過大體觀察;X線檢測(cè);組織切片顯微形態(tài)觀察:用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)分析;并用求積儀對(duì)兔顱骨缺損處成骨情況進(jìn)行測(cè)定;將數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,評(píng)估各組成骨的情況。
　　 結(jié)果：(1)質(zhì)粒(pDsVEGF

4、165)經(jīng)HandⅢ和SacⅡ雙酶切瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)為所需質(zhì)粒;以SmartSpecTM3000核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)得質(zhì)粒(VEGF165)的濃度為1.48±0.05mg/ml。(2)振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)檢測(cè)證實(shí)所制備的SPFCN具有超順磁性,氮含量為0.0054mg/L。(3)振蕩磁場(chǎng)下SPCPGM人工骨促進(jìn)成骨的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究表明:(1)E組血管化和成骨作用效果優(yōu)于其它4組,4周時(shí)可見支架開始降解吸收并見新生骨。(2)各組成骨情況:E組大量成