頭發(fā)mtDNA4977bp缺失與年齡的關(guān)系研究.pdf

1、目的：研究頭發(fā)mtDNA4977bp片段缺失與人群年齡的關(guān)系，建立相關(guān)方程，以期在微量物證中尋找更多的信息，為分子水平構(gòu)建犯罪分子特征提供更多的可能。 方法：按中國人口自然分布規(guī)律，隨機(jī)剪取54名漢族健康志愿者的頭發(fā)若干，各取4根用無水乙醇清洗、蒸餾水漂洗后，自然風(fēng)干，從近毛囊部位截取1．5cm，剪成0．3cm左右的片段，放入0．5miEP管中，加chelex一100和蛋白酶K消化抽提mtDNA，用所設(shè)計(jì)的引物分別對mtDNA保

2、守區(qū)和4977bp缺失突變區(qū)進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，若4977bp處不發(fā)生缺失，常規(guī)PCR不能擴(kuò)增正常約5000bp的堿基，所以沒有產(chǎn)物，反之，可以擴(kuò)增出線粒體片段缺失后相應(yīng)遺留序列的PCR產(chǎn)物。將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離，EB染色后，在Bio-Rad紫外凝膠成像儀掃描成像，確定其激光密度。以保守內(nèi)參照區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物激光密度作為總量，缺失區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物激光密度值作為缺失量，用缺失量／總量計(jì)算缺失率。 結(jié)果：25歲以下幾乎無缺失，

3、缺失區(qū)很少擴(kuò)增出產(chǎn)物，大于25歲者缺失區(qū)逐漸可擴(kuò)增出產(chǎn)物，且隨年齡增長，相同條件下擴(kuò)增產(chǎn)物增多，4977bp缺失率增大，各年齡段組間比較均P<0．05。根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，缺失率與年齡有直線相關(guān)趨勢，相關(guān)系數(shù)r=0．98，可以建立相關(guān)回歸方程Age=0．74(±0．02)×dmtDNA+21．03(±0．80)(dmtDNA為缺失4977bp的mtDNA的百分率)。 結(jié)論：頭發(fā)mtDNA4977bp缺失與年齡相關(guān)。隨年齡增大缺失率增加