2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的：構(gòu)建實(shí)時(shí)定量PCR（Real-time PCR）的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，為定量檢測(cè)人類線粒體DNA4977bp（mitochondrial DNA,mtDNA4977）缺失突變（簡(jiǎn)稱普遍缺失）的拷貝數(shù)，為探討線粒體mtDNA4977缺失突變與噪聲性耳聾的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：首先用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增人的線粒體mtDNA4977缺失片段CD、線粒體保守序列D-LOOP和人的管家基因GAPDH，瓊脂糖凝膠電泳，膠回收DNA，純化，

2、將其分別連接到PMD19-T載體上，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性克隆株大量擴(kuò)增后提取質(zhì)粒，通過(guò)酶切和測(cè)序檢測(cè)目的片段的插入情況。同時(shí)對(duì)插入正確的的質(zhì)粒一系列倍比梯度稀釋進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，通過(guò)其擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增效率等判斷評(píng)價(jià)構(gòu)建的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。
　　 結(jié)果：1.利用合成的引物擴(kuò)增出人線粒體mtDNA4977缺失片段CD、線粒體保守序列D-LOOP和人的管家基因GAPDH 2.將CD、D-LOOP和GAPDH三個(gè)目的片段分別

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