斜紋夜蛾核型多角體病毒對宿主種群內遺傳多態(tài)性的適應性研究.pdf

1、寄主遺傳多樣性對于其抵御寄生物感染至關重要，此已在脊椎動物和無脊椎動物中得到一些實驗證實。核型多角體病毒(NPV)作為昆蟲體內寄生物，常在寄主自然種群中侵染流行，是一類重要的害蟲生物防治資源。NPV受宿主遺傳多樣性的影響如何？這方面的研究報道較少。斜紋夜蛾Spodoptera litura是農業(yè)上的重大害蟲，其食量大，食性雜，且分布廣泛，常暴發(fā)成災。斜紋夜蛾核型多角體病毒(SpltNPV)是斜紋夜蛾自然種群的重要調節(jié)因子，已被開發(fā)為生物

2、殺蟲劑。斜紋夜蛾自然種群內遺傳多態(tài)性如何？其自然感染的NPV又是如何適應宿主遺傳多態(tài)性？這方面的研究不僅有利于闡明寄主和寄生物協(xié)同進化策略，同時也有利于更好地利用NPV進行有效的害蟲生物防治。為此，本文研究SpltNPV安徽和縣株的遺傳多態(tài)性，并同時研究斜紋夜蛾和縣種群內的遺傳多態(tài)性，進而研究病毒對宿主遺傳多態(tài)性的適應性。研究結果如下:
　　1在中國安徽和縣采集到自然感染病毒的斜紋夜蛾病蟲，從中分離出SpltNPV15個活體克隆株

3、系。對15個活體克隆株系基因組DNA分析表明，其EcoRⅠ、HindⅢ和PstⅠ限制性酶切圖譜未有明顯差異。進一步擴增15個活體克隆株系的細胞凋亡抑制（IAP）基因、p49基因、晚期表達因子lef-4、lef-5、lef-8、lef-11基因和DNA解旋酶基因等基因，發(fā)現(xiàn)其相同基因序列無差異;基因序列比對及系統(tǒng)發(fā)育分析表明，SpltNPV和縣株與已報道的SpltNPV其它株系的同源性很高，表明SpltNPVIAP宿主域相關等基因較為保守

4、。研究尚未發(fā)現(xiàn)SpltNPV和縣株內有豐富的遺傳多態(tài)性。
　　2從采集于安徽和縣甘藍上的斜紋夜蛾中隨機建立了7個單雌系，并在室內連續(xù)飼養(yǎng)。對各單雌系進行擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)分析，先利用4對引物進行初步篩選，選取擴增結果差異大的3個單雌系，進一步利用36對引物對45頭斜紋夜蛾個體（每單雌系15頭）分別進行擴增。共獲得1024個擴增片段，其中多態(tài)性條帶為880條，平均每對引物的擴增條帶為28.44條。多態(tài)性比率(PPB)平均

5、為86，Shannon's多樣性指數(shù)平均為0.4663，有效等位基因介于1.3816～1.7344之間。隨后用PopGen32軟件分析，發(fā)現(xiàn)單雌系間的分化系數(shù)(Gst)為0.3203。對3個單雌系的斜紋夜蛾進行遺傳距離的測定，結果發(fā)現(xiàn)斜紋夜蛾A、B和C3個單雌系間有一定的遺傳分化，其中B與A或C的遺傳分化更為明顯，遺傳相似系數(shù)均小于0.78。以上結果表明，斜紋夜蛾和縣種群內有一定的遺傳多態(tài)性。
　　3在獲得均來源于中國安徽和縣的有

6、遺傳差異斜紋夜蛾單雌系以及SpltNPV的基礎上，進一步研究了6個SpltNPV樣品對有遺傳差異的3個斜紋夜蛾單雌系致病力差異，發(fā)現(xiàn)病毒對不同單雌系的致病力存在顯著差異，其中對單雌系B的致病力最低，A次之，對C的致病力最高，且各差異在6個病毒活體克隆株系間均一致。較致病力差異，病毒在不同單雌系間的殺蟲速度差異要小，6個病毒活體克隆株系中有3個發(fā)現(xiàn)有殺蟲速度的差異，主要表現(xiàn)為對單雌系B的殺蟲速度顯著低于另兩個。研究結果表明NPV可以不同感