生防細(xì)菌的分離、篩選及生防潛能評(píng)估.pdf

1、本研究旨在分離和篩選生防細(xì)菌菌株，明確其分類(lèi)屬性，評(píng)估其生防潛力。取得了如下研究結(jié)果:
　　1.分離篩選獲得了促生細(xì)菌菌株AW-17和CanL-30。
　　分別從湖北武漢、湖北咸寧和安徽蕪湖采集的植物樣品中分離到82個(gè)菌株，包括細(xì)菌菌株和酵母菌菌株。采用擬南芥平板對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)和油菜浸種促生試驗(yàn)相結(jié)合的方法篩選得到2個(gè)促進(jìn)植物生長(zhǎng)的細(xì)菌菌株AW-17和CanL-30。菌株AW-17和CanL-30均能夠通過(guò)產(chǎn)生揮發(fā)性有機(jī)物促進(jìn)

2、擬南芥幼苗生長(zhǎng)，另外菌株AW-17還能夠產(chǎn)生吲哚乙酸IAA，具有溶解不可溶性磷的能力。將這兩株細(xì)菌用于盆栽油菜促生試驗(yàn)，結(jié)果表明:菌株AW-17對(duì)油菜生長(zhǎng)有穩(wěn)定促生效果，而菌株CanL-30則不具備盆栽促生能力。
　　2.明確了菌株AW-17和CanL-30的生物學(xué)特性，并對(duì)其進(jìn)行了鑒定。
　　菌株AW-17單菌落乳黃色，質(zhì)地光滑粘稠，在8℃～35℃條件下均能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度范圍為20℃～30℃，在7％及以下的鹽濃度條件下

3、均能生長(zhǎng)，但無(wú)法在10％鹽濃度條件下生長(zhǎng)，革蘭氏染色陰性，不產(chǎn)生芽孢。生理生化測(cè)定結(jié)果和16SrDNA序列分析表明:菌株AW-17屬于液質(zhì)沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。菌株CanL-30單菌落乳白色，質(zhì)地光滑干燥，在15℃～40℃條件下能較好的生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度范圍為20℃～30℃，在7％及以下的鹽濃度條件下均能生長(zhǎng)，但無(wú)法在10％鹽濃度條件下生長(zhǎng)，革蘭氏染色陽(yáng)性，產(chǎn)生芽孢。鑒定結(jié)果表明菌株CanL-30屬于枯

4、草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。
　　3.篩選出拮抗菌株CanL-30，并對(duì)其產(chǎn)生的抗真菌代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化。
　　利用平板對(duì)峙培養(yǎng)和離體油菜葉片接種相結(jié)合的方法，篩選到1株能夠穩(wěn)定抑制灰葡萄孢的拮抗菌株CanL-30，其能夠?qū)Χ喾N病原菌產(chǎn)生拮抗作用，二分格皿試驗(yàn)和帶毒平板試驗(yàn)結(jié)果表明菌株CanL-30主要通過(guò)產(chǎn)生抗真菌代謝產(chǎn)物抑制病原菌的生長(zhǎng)。菌株CanL-30在NB培養(yǎng)基中，28℃、150r/min

5、的條件下?lián)u培72h，產(chǎn)生的抗菌代謝產(chǎn)物抑菌效果最好，抑菌率達(dá)到90％，利用酸沉淀和甲醇萃取的方法對(duì)該條件下CanL-30產(chǎn)生的抗菌代謝產(chǎn)物進(jìn)行提取，帶毒平板試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度粗提物平板對(duì)灰霉菌均有不同程度的抑制作用，其中365μg/mL粗提物平板對(duì)灰霉菌的抑菌率高達(dá)100％。CanL-30抗真菌粗提物具有耐高溫、抗紫外的特性，其在100℃的水浴鍋中處理60min鐘后，抑菌活性與對(duì)照相比無(wú)差異。用紫外燈(UV-C，30W)處理抗菌粗提