分子伴侶Hsp104對(duì)PrP106-126肽聚集形成纖維影響的初步研究.pdf

1、目的：(1)研究Hsp104是不是可以阻止異常朊蛋白的聚集或者對(duì)異常朊蛋白的聚集具有解聚作用，為研究PrPSc聚集體或單體對(duì)神經(jīng)細(xì)胞是具有保護(hù)作用還是毒性作用具有一定的意義；(2)根據(jù)PrP106-126肽具有聚集成纖維的特點(diǎn)，將其作為PrPSc聚集的模式，擬通過(guò)Hsp104干擾PrP106-126纖維形成，來(lái)探討PrPSc聚集形成的機(jī)制。
　　 方法：(1)利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)全長(zhǎng)Hsp104蛋白；(2)PrP106-126肽

2、用緩沖液溶解，然后把樣品分成兩組，一組加Hsp104蛋白5μM，另一組未加Hsp104蛋白。每組各6個(gè)樣品，37°C，分別孵育0h、12h、24h、48h、72h和96h;(3)采用熒光光譜法（ThT分析法）、透射電子顯微鏡、原子力顯微鏡、圓二色譜法和MTT比色法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果：利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了全長(zhǎng)Hsp104蛋白；在體外實(shí)驗(yàn)過(guò)程中證實(shí)PrP106-126可以形成纖維，而且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，纖維越來(lái)越細(xì)

3、，相互交織形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。PrP106-126肽在不同的細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞和SK細(xì)胞）中具有相似的毒性。而且也發(fā)現(xiàn)PrP106-126肽聚集成纖維后比PrP106-126肽對(duì)細(xì)胞的毒性要低。當(dāng)Hsp104存在時(shí)PrP106-126肽可以保持其對(duì)細(xì)胞的毒性。并且能夠明顯的抑制PrP106-126纖維的形成，同時(shí)其解聚作用也很明顯。其作用機(jī)制是通過(guò)改變PrP106-126肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)從β-折疊結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變成無(wú)規(guī)卷曲，而使已經(jīng)聚集形成的纖維發(fā)生解

4、聚，從而可以拮抗PrP106-126肽纖維聚集的形成來(lái)阻止淀粉樣轉(zhuǎn)變。從而保持PrP106-126肽對(duì)細(xì)胞的毒性。
　　 結(jié)論：利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)全長(zhǎng)熱休克蛋白Hsp104蛋白；從動(dòng)力學(xué)、形態(tài)學(xué)、二級(jí)結(jié)構(gòu)三方面證實(shí)熱休克蛋白Hsp104在體外可抑制PrP106-126肽聚集形成纖維；體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證實(shí)熱休克蛋白Hsp104能夠抑制PrP106-126肽聚集形成纖維，還可維持PrP106-126肽的細(xì)胞毒性作用；體外動(dòng)力學(xué)