表面修飾透明質(zhì)酸的PBAE納米粒攜載阿霉素逆轉乳腺癌細胞耐藥的研究.pdf

1、目的：
　　癌癥已成為全球首要的疾病死亡原因?；熓前┌Y治療最重要的方法之一，然而，腫瘤細胞對化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性，往往導致化療失敗。納米載體技術的發(fā)展為克服臨床化療耐藥提供了新的研究機遇。本研究構建了一種具有聚氨基酯(PBAE)內(nèi)核與透明質(zhì)酸(HA)外殼的納米載體系統(tǒng)，用于攜載化療藥物阿霉素(DOX)，以期高效逆轉乳腺癌細胞的耐藥性。
　　內(nèi)容：
　　本論文的研究內(nèi)容分為兩部分。第一部分包括：納米載藥體系的制備、表

2、征，以及載藥與體外釋藥性能的考察。第二部分包括：納米載藥體系逆轉乳腺癌細胞耐藥性的體外考察（細胞毒性、細胞凋亡及細胞周期考察）及其逆轉機制的初步探討。
　　方法：
　　1.納米載藥體系的制備、表征，以及載藥與體外釋藥性能的考察：采用O/W乳化溶劑揮發(fā)法制備 PBAE/DOX納米核，采用熒光分光光度法考察不同PBAE/DOX投料比下DOX的載藥量與包封率，評價 PBAE納米核對DOX的攜載能力；利用紅外(IR)和熒光光譜分析P

3、BAE/DOX中PBAE和DOX分子間的相互作用，并利用透射電鏡和電位-粒徑儀對其形貌、粒徑及其分布進行表征；采用共孵育的方法，通過正負電荷間的相互作用實現(xiàn) HA對PBAE/DOX的表面修飾，制備納米載藥體系HA/PBAE/DOX，探討不同投料比對其粒徑與 Zeta電位的影響，并檢測 HA/PBAE/DOX的形貌、粒徑與表面荷電性質(zhì)；采用動態(tài)透析法考察PBAE/DOX與HA/PBAE/DOX在不同pH值釋放介質(zhì)中的體外釋藥特征。

4、　　2. HA/PBAE/DOX對乳腺癌細胞耐藥性的逆轉效應考察：利用CCK-8試劑盒檢測游離DOX、PBAE/DOX和HA/PBAE/DOX對正常乳腺癌細胞株MCF-7與耐藥乳腺癌細胞株MCF-7/ADR的細胞毒性，計算半數(shù)抑制濃度(IC50)；通過流式細胞術分析游離 DOX、PBAE/DOX和 HA/PBAE/DOX對 MCF-7/ADR細胞凋亡的誘導作用以及對細胞周期的影響，綜合評價 HA/PBAE/DOX對MCF-7/ADR細胞

5、耐藥性的逆轉效應。
　　3.耐藥性的逆轉機制探討：采用流式細胞術和激光共聚焦顯微鏡檢測HA/PBAE/DOX在MCF-7/ADR細胞中的蓄積情況及分布；通過競爭實驗考察游離 HA對 HA/PBAE/DOX入胞的影響，初步探討 HA/PBAE/DOX對MCF-7/ADR細胞耐藥性的逆轉機制。
　　結果：
　　1.成功構建納米載藥體系 HA/PBAE/DOX，呈規(guī)則球狀形態(tài)，具有經(jīng)典的核-殼結構；當HA/PBAE/DOX投

6、料質(zhì)量比為15/10/3時，納米載藥體系的平均粒徑為185.0nm，Zeta電位為?29.3 mV；DOX通過疏水作用力和氫鍵作用高效包載于PBAE納米核，DOX載藥量約為7.5％。
　　2.體外釋放實驗結果顯示，隨著釋放介質(zhì) pH的降低，納米載藥體系PBAE/DOX和 HA/PBAE/DOX中 DOX的釋放速率逐漸增加，呈現(xiàn)顯著的pH-敏感藥物釋放特性。
　　3.在耐藥乳腺癌MCF-7/ADR細胞中，PBAE/DOX與HA

7、/PBAE/DOX均表現(xiàn)出顯著強于游離DOX的細胞毒性；相比于PBAE/DOX，HA/PBAE/DOX對MCF-7/ADR細胞表現(xiàn)出一定的選擇性，能顯著誘導MCF-7/ADR細胞凋亡，并阻滯細胞周期于S期（DNA合成期），說明HA/PBAE/DOX具有逆轉乳腺癌細胞耐藥性的作用。
　　4. HA/PBAE/DOX能夠高效攜載DOX進入耐藥乳腺癌MCF-7/ADR細胞，并且其入胞作用能被游離HA顯著抑制，說明HA/PBAE/DOX可

8、以通過黏附因子CD44介導的胞吞途徑進入MCF-7/ADR細胞，從而逃逸細胞表面過表達的P-糖蛋白（P-gp）的外排作用，逆轉細胞耐藥。
　　結論：
　　本研究成功制備了納米載藥體系 HA/PBAE/DOX，具有經(jīng)典的核-殼結構，呈現(xiàn)明顯的pH-敏感藥物釋放特性；能夠顯著逆轉乳腺癌MCF-7/ADR細胞的耐藥性，逆轉機制與其通過CD44介導的胞吞途徑入胞，逃逸P-gp的外排作用相關。因此，該納米載藥體系有望用于臨床耐藥乳腺癌