雞白細(xì)胞介素-1和白細(xì)胞介素-6雙抗夾心ELISA檢測方法的建立.pdf

1、分類號:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞白細(xì)胞介素一1和白細(xì)胞介素一6雙抗夾心ELISA檢測方法的建立EstablishmentofdoublesandwichELISAforChickeninterleukin一1andChickeninterleukin一6detection研究生:彭俊平指導(dǎo)教師:程國富教授指導(dǎo)小組:程國富教授胡薛英副教授張萬坡副教授谷長勤講師專業(yè):基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:動物病理學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:200

2、9.6華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院二00九年六月雞白細(xì)胞介素一l和白細(xì)胞介素一6雙抗夾心ELISA檢測方法的建立1.2.2總RNA的提取...............................................……141.2.3〔’hIL一j和〔決兒萬基因的PCR擴(kuò)增.......................……，........……141.2.4PCR產(chǎn)物的回收與純化.........................

3、................................……151.2.5目的基因與克隆載體PMD18一T的連接...............................……161.2.6E。oliDH5a感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)...................……161.2.7連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化..............................................................

4、........……171.2.8質(zhì)粒的提取..............................................................................……171.2.9重組質(zhì)粒的鑒定及序列測定..................................................……181.2.10重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建..............................

5、..............................……191.2.n重組陽性表達(dá)質(zhì)粒的篩選與鑒定........................................……211.2.12重組表達(dá)質(zhì)粒在E.coliBL21(DE3)菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及檢測…221.2.13重組蛋白的純化....................................................................…

6、…242結(jié)果與分析.....................................................................................................……242.1ChIL一I和C人兒萬基因的擴(kuò)增...........................................................……242.2重組克隆質(zhì)粒的鑒定及序列測定.…、....

7、............................................……252.2.1重組克隆質(zhì)粒PM[D18~不Chll二一1和PMD18一TC句工6的酶切鑒定二252.2.2重組質(zhì)粒PMD18一TChIL一1和PMD18一TChIL一6的PCR鑒定262.2.3序列測定及結(jié)果分析..............................................................……262.

8、3重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定與序列測定.................................................……，…262.3.1重組表達(dá)質(zhì)粒pE’T28aChi工一1和PGEX.KG.ChIL一的酶切鑒定…262.3.2重組表達(dá)質(zhì)粒pET28aC刊盯l和PGEX‘KG‘C刊[L~6的PCR鑒定二272.3.3序列測定..................................................

9、................................……282.4表達(dá)蛋白的SDS一PAGE和W七stem一blot分析..................................……282.4.1ChIL一1蛋白的SDS一PAGE分析............................................……282.4.2ChIL一6蛋白的SDS一PAGE分析....................

10、........................……282.4.3重組蛋白的W七stem一blot分析...............................................……292.5重組蛋白的可溶性分析及最佳表達(dá)條件優(yōu)化結(jié)果.........................……302.5.1重組蛋白的可溶性分析結(jié)果................................................