應(yīng)用2-DE技術(shù)對(duì)不同天數(shù)UV-B輻射前后小麥葉片差異蛋白的分析.pdf

1、近年來，由于全球平均臭氧層逐年減少，導(dǎo)致到達(dá)地表的太陽紫外輻射(UV-B)增強(qiáng)。因此為研究增強(qiáng)UV-B輻射對(duì)植物的影響，本實(shí)驗(yàn)采取生長(zhǎng)于中國(guó)北方的經(jīng)濟(jì)作物“晉麥47號(hào)”冬小麥的幼苗葉片進(jìn)行研究。對(duì)不同天數(shù)UV-B輻射前后小麥幼苗葉片平均長(zhǎng)度、葉面積、總重量以及蛋白質(zhì)含量進(jìn)行研究從而確定正常生長(zhǎng)組（即對(duì)照組簡(jiǎn)稱CK組）與UV-B輻射組（即處理組簡(jiǎn)稱B組）差異最大的天數(shù)，在選取合適的樣品制備方式的基礎(chǔ)上，建立與優(yōu)化便于分析小麥葉片蛋白的雙向

2、電泳體系從而確保得到清晰的圖像，進(jìn)一步便于雙向電泳技術(shù)結(jié)合PDQuest軟件分析UV-B輻射前后的差異蛋白點(diǎn)，將其經(jīng)質(zhì)譜鑒定后，分析其相應(yīng)的功能。本實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果顯示:
　　 (1)若UV-B輻射持續(xù)作用的時(shí)間較短（3-5天），則小麥幼苗的生長(zhǎng)將得到促進(jìn)，反之若UV-B輻射作用的時(shí)間較長(zhǎng)（7-9天），則小麥幼苗的生長(zhǎng)將得到抑制，通過對(duì)葉片長(zhǎng)度、葉面積、總重量各表觀指標(biāo)的分析以及利用SDS-PAGE對(duì)蛋白質(zhì)含量的分析，均顯示第4天

3、、第8天的小麥幼苗葉片變化比較明顯。因此，在后面的研究中實(shí)驗(yàn)材料選取生長(zhǎng)第4天、8天的。
　　 (2)采用尿素/硫脲法對(duì)小麥幼苗葉片總蛋白進(jìn)行提取，在此基礎(chǔ)上通過丙酮多步除鹽獲得樣品，加大聚焦程序中的除鹽時(shí)間、搭制鹽橋、采取被動(dòng)水化與主動(dòng)水化結(jié)合的方式，并在SDS-PAGE過程中選擇120V電壓，最終建立適用于小麥幼苗葉片分析的雙向電泳體系。
　　 (3)利用PDQuest軟件對(duì)小麥幼苗葉片蛋白質(zhì)2-DE圖譜進(jìn)行分析，第

4、4天的對(duì)照組與處理組2-DE圖譜中有11個(gè)點(diǎn)具有明顯差異，第8天的對(duì)照組與處理組2-DE圖譜中有23個(gè)點(diǎn)具有明顯差異。
　　 (4)利用質(zhì)譜鑒定技術(shù)對(duì)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果中明顯不同的蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定，在生長(zhǎng)第4天的小麥幼苗葉片2-DE圖譜中的3個(gè)差異點(diǎn)被確認(rèn)，分別是:銅/鋅過氧化物歧化酶、鈣調(diào)素、1，5-二磷酸核酮糖羧化酶;第8天的小麥幼苗葉片2-DE圖譜中5個(gè)差異蛋白點(diǎn)被確認(rèn)，分別是:銅/鋅過氧化物歧化酶、鈣調(diào)磷酸酶、1，5-二磷酸核酮