應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大鼠血漿中左旋多巴、MD01及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、貓豆是豆科藜豆屬植物龍爪藜豆（Mucuna pruriens var.utilis Burck）的種子，其中含有大量的左旋多巴（4-7％），是一種被廣泛用于治療帕金森病的傳統(tǒng)藥材。與傳統(tǒng)左旋多巴制劑相比，貓豆提取物（MPE）在長(zhǎng)期治療帕金森病過(guò)程中不會(huì)造成異動(dòng)癥等副作用。除左旋多巴外，貓豆中還含有其衍生物，如包括1,1-二甲基-3-羧基-6,7-二羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉（MD01）在內(nèi)的簡(jiǎn)單異喹啉類氨基酸類微量成分。本論文建立

2、了同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中左旋多巴及MD01的可靠、靈敏的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)方法，并應(yīng)用于大鼠單次及多次灌胃給予左旋多巴、MPE及左旋多巴/MD01后的藥代動(dòng)力學(xué)研究，為闡明貓豆中含有的其它成分是否對(duì)左旋多巴藥代動(dòng)力學(xué)特征產(chǎn)生影響提供數(shù)據(jù)參考。
　　在LC-MS/MS分析方法開(kāi)發(fā)中，對(duì)質(zhì)譜方法、色譜方法、樣品處理方法及穩(wěn)定劑條件等方面進(jìn)行了優(yōu)化。質(zhì)譜檢測(cè)采用電噴霧離子源（ESI）正離子模式多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）方法，左旋多巴、MD01及內(nèi)標(biāo)甲基

3、多巴的監(jiān)測(cè)離子對(duì)分別為m/z198.1→135.0、m/z238.3→175.2及m/z212.1→139.0。為解決其基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的離子抑制，對(duì)色譜條件及樣品提取條件進(jìn)行了系統(tǒng)的優(yōu)化，最終選用Thermo Aquasil C18色譜柱(50×2.1mm，3μm)，乙腈及0.2%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，以0.6mL/min流速進(jìn)行梯度洗脫，在得到理想保留的情況下將基質(zhì)效應(yīng)的影響降低。由于化合物存在蛋白結(jié)合現(xiàn)象，使用純乙腈沉淀時(shí)回收率不理想

4、，通過(guò)優(yōu)化最終選用2%甲酸乙腈進(jìn)行蛋白沉淀以獲得較好的提取回收率。左旋多巴及MD01容易氧化降解，因此利用抗氧化劑焦亞硫酸鈉使其在純?nèi)芤杭盎|(zhì)中保持穩(wěn)定。本方法線性范圍為20.0-10000ng/mL，分析時(shí)間短（3.5min），具有較好的準(zhǔn)確度（RE-9.7%~10.8%）及批內(nèi)、批間精密度（RSD≤12.3%）。
　　該方法經(jīng)完整驗(yàn)證后運(yùn)用于單次及多次灌胃給予左旋多巴、MPE、左旋多巴/MD01后的大鼠血漿中左旋多巴檢測(cè)。其藥

5、代動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示：在同等劑量下單次灌胃給藥后的各組間差異并不明顯，與左旋多巴給藥組相比，MPE給藥組及左旋多巴/MD01給藥組僅在平均滯留時(shí)間（MRT）上有所提高；而在連續(xù)給予MPE408mg/kg7天后，左旋多巴的AUC(0-∞)為641405±81451ng.min/mL，與連續(xù)給予左旋多巴單體（AUC(0-∞)：416824±109850ng.min/mL）相比有明顯升高。該研究結(jié)果揭示，采用MPE多次給藥時(shí)的主要藥效成分左旋多巴