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文檔簡介
1、歐亞旋覆花(Inula britannica L.)是一種傳統(tǒng)植物藥,倍半萜內(nèi)酯類和酚酸類成分是歐亞旋覆花中的主要活性成分,但由于種類多樣且含量較低,使其深入研究受到限制。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)具有專屬、快速、靈敏等優(yōu)點,是復(fù)雜樣品中化學(xué)成分鑒定和定量分析的有力工具。本研究即采用LC-MS技術(shù)對歐亞旋覆花中的6種倍半萜內(nèi)酯類成分和9種酚酸類成分共15種成分進行分析。在總結(jié)倍半萜內(nèi)酯類和酚酸類成分化合物電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律的基
2、礎(chǔ)上,建立歐亞旋覆花中的15種成分的二級質(zhì)譜庫;建立歐亞旋覆花中15種成分鑒定及定量的LC-MS分析方法,并用于不同產(chǎn)地的歐亞旋覆花藥材的比較和大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物后該15種成分的藥代動力學(xué)研究。
第一部分、歐亞旋覆花中15種成分的液質(zhì)聯(lián)用法鑒定及定量分析研究
目的:建立一種快速、準(zhǔn)確、可同時鑒定及定量歐亞旋覆花中15種化學(xué)成分(6種倍半萜內(nèi)酯類成分和9種酚酸類成分)的HPLC-ESI-MS分析方法,并用于歐
3、亞旋覆花藥材分析。
方法:建立15種化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)二級質(zhì)譜庫,由MRM-IDA-EPI模式對15種化合物結(jié)構(gòu)進行確證,采用MRM正負(fù)離子掃描模式建立其含量測定方法,并采用所建立的方法對不同產(chǎn)地的15批歐亞旋覆花藥材進行分析。質(zhì)譜條件:ESI源;正負(fù)離子分別監(jiān)測,6種倍半萜內(nèi)酯類成分采用正離子模式,9種酚酸類成分采用負(fù)離子模式。色譜柱:Sepax GP-C18柱,3μm,100×2.1 mm;柱溫:25℃。流動相:乙腈-水(1‰
4、甲酸)梯度洗脫;流速:300μL/min;進樣量:5μL。
結(jié)果:15種化學(xué)成分在測定濃度范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系,精密度、準(zhǔn)確度、檢測限和定量限均符合要求。樣品測定結(jié)果表明,歐亞旋覆花產(chǎn)地是影響15種成分含量的較為重要的因素之一。同時發(fā)現(xiàn),這15種成分主要存在于其花中,莖及地上部分相對較低。
結(jié)論:本法簡便、快速、專屬性好,首次建立并應(yīng)用LC-MS方法鑒定及定量分析歐亞旋覆花中15種化學(xué)成分。該法對于歐亞旋覆花藥
5、材的質(zhì)量控制具有重要意義。
第二部分、液質(zhì)聯(lián)用法測定口服給予歐亞旋覆花提取物后的大鼠血漿中的15種歐亞旋覆花化學(xué)成分及其藥代動力學(xué)研究
目的:建立測定大鼠血漿中15種歐亞旋覆花化學(xué)成分含量的LC-MS方法,并用于大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物后該15種成分的藥代動力學(xué)研究。
方法:大鼠灌胃給予歐亞旋覆花提取物(0.5、1.0、1.5 g/kg)后,分別于給藥后0.083、0.17、0.33、0.5、1、2、4
6、、6、8和12h,眼內(nèi)眥靜脈叢取血,制備血漿樣品,采用液-液萃取方法進行樣品預(yù)處理,磺胺甲噁唑為內(nèi)標(biāo)。色譜柱為C18柱,流動相為乙腈-水(1‰甲酸)梯度洗脫。采用電噴霧離子源(ESI),正負(fù)離子模式掃描,多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式進行檢測。
結(jié)果:專屬性和基質(zhì)效應(yīng)考察表明此方法專屬且沒有顯著的基質(zhì)效應(yīng)。該法各化合物的線性關(guān)系良好,其相關(guān)系數(shù)≥0.99。日內(nèi)和日間檢測精密度均小于13.6%,日內(nèi)和日間檢測準(zhǔn)確度均小于11.4%。在
7、穩(wěn)定性試驗研究中,旋覆花內(nèi)酯和旋覆花黃酮在大鼠血漿內(nèi)的穩(wěn)定性的相對誤差(RE)值均小于11.3%?;衔?-6在不同劑量組僅有幾個時間點能夠檢測到,其余化合物1及化合物7-15在各劑量組大鼠各時間點的血藥濃度繪制血藥濃度-時間(c-t)曲線。以非房室模型計算大鼠給藥后的藥物動力學(xué)參數(shù)。化合物1、7-15的Tmax均在0.4 h左右,且Cmax、AUCo-t和AUCo-∞均隨給藥劑量的增加呈線性增加。
結(jié)論:該法靈敏度高、選擇性
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