基于CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4、ABCB1基因多態(tài)性的伏立康唑個體化用藥研究.pdf

1、背景:
　　背景近幾十年來,侵襲性真菌感染的情況日益嚴峻,并伴隨著較高的病死率,是院內(nèi)感染的重要死亡原因之一。目前抗真菌藥物仍是控制侵襲性真菌感染的主要手段;伏立康唑作為第二代三唑類抗真菌藥,具有更強的靶點親和力和抗真菌活性,已被多個指南推薦為治療侵襲性曲霉菌感染的一線治療藥物。伏立康唑主要由肝臟CYP450酶系代謝,CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9系其主要代謝酶,ABCB1是體內(nèi)主要的轉(zhuǎn)運蛋白,且CYP2C19、CYP

2、3A4、CYP2C9、ABCB1存在的基因多態(tài)性能夠不同程度的影響酶代謝或轉(zhuǎn)運蛋白活性;穩(wěn)態(tài)谷濃度是伏立康唑體內(nèi)暴露劑量的評價指標(biāo),與治療效果及不良反應(yīng)密切相關(guān);目前在伏立康唑的臨床抗真菌治療中仍存在著一些問題:1.伏立康唑治療窗窄;2.伏立康唑個體差異顯著;3.伏立康唑有較嚴重的不良反應(yīng);4.伏立康唑治療費用高。伏立康唑的臨床治療受多種遺傳因素及非遺傳因素的影響,截止現(xiàn)在,尚不能完全解釋伏立康唑個體差異的原因。當(dāng)前亟需解決的就是探究伏

3、立康唑顯著個體差異的影響因素,從而實現(xiàn)伏立康唑的個體化用藥。
　　目的:
　　1、監(jiān)測中國漢族血液病患者伏立康唑血清初始穩(wěn)態(tài)谷濃度[(Css)min],探討伏立康唑藥代動力學(xué)特點;2、通過對中國漢族血液病患者CYP2C19,CYP3A4,CYP2C9以及ABCB1基因多態(tài)性的檢測,初步了解河南省人民醫(yī)院中國漢族血液病患者伏立康唑代謝酶及及ABCB1基因多態(tài)性的分布特點;3、探討CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9等主要

4、代謝酶以及轉(zhuǎn)運蛋白ABCB1的基因多態(tài)性對河南省人民醫(yī)院中國漢族血液病患者(Css)min的影響;4、探討河南省人民醫(yī)院中國漢族血液病患者臨床非遺傳因素對(Css)min的影響。
　　方法:
　　1、篩選于2015年3月至2016年9月收住河南省人民醫(yī)院,符合2013年《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準與治療原則》血液病侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準,使用伏立康唑治療或預(yù)防真菌感染并接受伏立康唑血藥濃度監(jiān)測的中國漢族血液病

5、患者進行回顧性研究;2、采用高效液相色譜法(HPLC)監(jiān)測伏立康唑血清谷濃度,通過全血DNA提取試劑盒提取DNA,紫外/可見光分光光度計對提取DNA進行濃度和質(zhì)量的檢測,并將DNA樣本保存于-40℃冰箱中;3、采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)技術(shù)對21個CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9、ABCB1等的單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs)進行基因分型。PCR引物和單堿基延伸引物由Assay Design

6、er軟件包設(shè)計,檢測過程采用Mass ARRAY系統(tǒng)完成。最終結(jié)果由Mass ARRAY RT軟件系統(tǒng)實時讀取,Mass ARRAY Typer軟件系統(tǒng)完成基因分型;4、檢索河南省人民醫(yī)院電子病歷系統(tǒng),記錄入選患者人口統(tǒng)計學(xué)資料、伏立康唑用藥途徑、基礎(chǔ)疾病、合并用藥、實驗室檢查以及SNPs分型結(jié)果和(Css)min等數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫;5、采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析,采用χ~2檢驗對研究中21個位點的基因分型結(jié)果進行

7、Hardy-Weinberg平衡檢驗;采用SHEsis在線軟件平臺進行連鎖不平衡分析。單因素分析采用非參數(shù)檢驗(兩組之間采用Mann-Whitney U檢驗,三組間采用Kruskal-Wallis檢驗),定量數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)檢驗;最優(yōu)尺度回歸用于確定導(dǎo)致(Css)min變異性的影響因素,P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、本研究共納入86名中國漢族血液病患者，106例次(Css)min，

8、其中確診侵襲性真菌?。≒roven IFD）3例，臨床診斷侵襲性真菌?。≒robable IFD）11例，擬診斷侵襲性真菌?。?Possible IFD）32例以及未確定侵襲性真菌?。║ndetermined IFD）40例；(Css)min變異系數(shù)達65.8％。
　　2、本研究中21個SNPs的次等位基因頻率（Minor allele frequency，MAF）與全球MAF存在一定程度的差異性，其中rs17882687、rs1

9、2248560、rs1799853、rs2740574、rs35599367、rs10264272和rs41303343次等位基因頻率（Minor allele frequency，MAF）非常低或為0；
　　3、CYP2C19基因多態(tài)性是(Css)min變異性的重要影響因素，其中相對于快代謝型患者，(Css)min/D在存在rs4244285或rs4986893突變的（中間代謝型或慢代謝型）患者中更高，同時(Css)min/D與

10、年齡呈正相關(guān)；
　　4、在中間代謝型或慢代謝型患者中，年齡及rs4646437（CYP3A4）基因型是造成(Css)min/D個體間差異的影響因素；其中rs4646437的突變（CT或TT）及高年齡與較高的(Css)min/D具有相關(guān)性；在快代謝型患者中，BMI與(Css)min/D呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、伏立康唑個體差異較大，(Css)min變異性顯著；
　　2、CYP2C19基因多態(tài)性是導(dǎo)致(Css)