Ang Ⅱ通過AT1R降低大鼠心肌細(xì)胞中AngptI2的表達(dá).pdf

1、心力衰竭是多種疾病的終末階段，死亡率極高。隨著人口老齡化進(jìn)程的發(fā)展和社會(huì)壓力的增加，心力衰竭的發(fā)病率逐年上升并呈現(xiàn)出發(fā)病年齡年輕化的趨勢(shì)，給社會(huì)及家庭帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。而心肌肥厚作為心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)，已經(jīng)成為探究心力衰竭發(fā)病機(jī)制及尋找新的治療手段的研究重點(diǎn)。因此，探究心肌肥厚相關(guān)發(fā)病機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)是降低心力衰竭發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。
　　目的:
　　本實(shí)驗(yàn)旨在探究血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ

2、，AngⅡ)對(duì)大鼠心肌細(xì)胞中血管生成素樣蛋白2(Angiopoietin-like protein2，AngptI2)水平的影響。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究AngⅡ影響AngptI2變化的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1.選用正常Wistar大乳鼠（3天以內(nèi)）30只;
　　2.分離純化大乳鼠心肌細(xì)胞，接種至培養(yǎng)板，待細(xì)胞穩(wěn)定貼壁后，將細(xì)胞分為正常對(duì)照組，100nmol/L AngⅡ刺激組(0h、6h、24h、48h)，24h

3、 AngⅡ刺激組(0nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L),AngⅡ(100nmol/L,24h)+ losartan(10-4mol/L), normal+losartan(10-4mol/L), AngⅡ(100nmol/L,24h)+PD123319(10-4mol/L), normal+PD123319(10-4mol/L)。
　　3.收集各組細(xì)胞培養(yǎng)基;提取各組蛋白、RNA;固定24孔板

4、各處理組細(xì)胞。
　　4.應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法鑒定心肌細(xì)胞;應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組培養(yǎng)中AngptI2的表達(dá)水平;應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光法、Western Blot技術(shù)、RT-PCR法分別在細(xì)胞、蛋白和基因水平檢測(cè)各組AngptI2的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.心肌細(xì)胞的鑒定:細(xì)胞貼壁第二天，顯微鏡下心肌細(xì)胞呈不規(guī)則形狀、聚集成簇生長(zhǎng)，并以一定的節(jié)律跳動(dòng)，同時(shí)，視野中可見長(zhǎng)梭形細(xì)胞，為心臟成纖維細(xì)胞;倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞

5、免疫熒光結(jié)果，心肌細(xì)胞胞漿中高表達(dá)肌動(dòng)蛋白α(α-SMA)，而心臟成纖維細(xì)胞基本不表達(dá)α-SMA。心肌細(xì)胞純度約為94％。
　　2.AngⅡ?qū)ngptl2表達(dá)量的影響:通過對(duì)AngⅡ在不同濃度、不同時(shí)間條件下對(duì)AngptI2的表達(dá)量的作用的研究，確定100nmol/L AngⅡ刺激24小時(shí)時(shí)，AngptI2的表達(dá)量較對(duì)照組下降最明顯(P＜0.05)。
　　3.AT1R和AT2R拮抗劑的作用:在100nmol/L AngⅡ刺

6、激24h條件下，AngⅡ+losartan組中AngptI2的表達(dá)量較AngⅡ組明顯增加(P＜0.05)，而normal+losartan組和normal+PD123319組中Angptl2的表達(dá)量與正常對(duì)照組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); AngⅡ+ PD123319組中AngptI2的表達(dá)量較AngⅡ組無明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論及意義:
　　1.AngⅡ在較低濃度時(shí)可以下調(diào)心肌細(xì)胞中AngptI2的表