高血壓左心室肥大心肌細(xì)胞中FAK表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)檢測(cè)粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)在左心室肥大心肌細(xì)胞中表達(dá)和定位的變化，說(shuō)明FAK參與了心肌肥大時(shí)細(xì)胞信號(hào)的傳遞，心肌纖維合成與組裝的調(diào)節(jié)，探討FAK在高血壓心室肥大發(fā)生發(fā)展機(jī)制中的作用。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇：以2、6、12、18月齡的特發(fā)性高血壓心衰(Spontaneously Hypertensive Heart Failure，SHHF)大白鼠為研究對(duì)象，按月齡分

2、組，每月齡6只。相同月齡Wister-Kyoto(WKY)大白鼠作為對(duì)照組，按月齡分組，每月齡6只。 2、蛋白質(zhì)分離、電泳和Western Blot方法：將左心室組織分別制成含有總蛋白、漿蛋白、膜蛋白和核蛋白的組織勻漿，檢測(cè)FAK在不同月齡SHHF大白鼠左心室不同組織勻漿中的表達(dá)。 3、免疫熒光染色方法和共聚焦顯微鏡觀察：采用對(duì)SHHF大白鼠左心室分離心肌細(xì)胞和左心室組織冰凍切片的免疫熒光標(biāo)記，通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察FAK

3、在心肌細(xì)胞亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的分布。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。 結(jié)果： Western Blot結(jié)果顯示：FAK在2月齡SHHF大白鼠心肌組織的表達(dá)與WKY大白鼠比較無(wú)顯著性差別，但從6月齡開(kāi)始，F(xiàn)AK在SHHF大白鼠心肌組織中表達(dá)明顯增加，并且一直持續(xù)到12、18月齡。盡管FAK在2、6、12、18月齡SHHF心肌組織胞漿蛋白中的表達(dá)無(wú)明顯

4、變化；但是，F(xiàn)AK在SHHF大白鼠心肌組織膜蛋白和核蛋白中的表達(dá)，從6月齡開(kāi)始也明顯增加，并且一直持續(xù)到12和18月齡組。免疫熒光染色結(jié)果顯示：2月齡時(shí)，實(shí)驗(yàn)組SHHF大白鼠與對(duì)照組WKY大白鼠心肌細(xì)胞中FAK熒光分布相似，即胞漿彌漫性綠色熒光，核內(nèi)極弱的小顆粒點(diǎn)狀熒光，膜上較弱的點(diǎn)狀熒光顆粒。這一熒光分布特征在6、12、18月齡的WKY大白鼠心肌細(xì)胞中無(wú)明顯變化，而在6、12、18月齡的SHHF大白鼠心肌細(xì)胞中，在細(xì)胞膜，尤其是細(xì)胞兩

5、端的閏盤上觀察到FAK強(qiáng)的綠色線狀熒光，核內(nèi)亦出現(xiàn)明顯的FAK的強(qiáng)熒光顆粒。 結(jié)論： SHHF大白鼠在6月齡時(shí)，心肌纖維橫向性生長(zhǎng)達(dá)到高峰，同時(shí)開(kāi)始心肌纖維的縱向性生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致失代償性心肌肥大及心力衰竭。免疫熒光染色和Western Blot結(jié)果均顯示：從6月齡開(kāi)始，在SHHF大白鼠左心室肥大心肌細(xì)胞中，F(xiàn)AK表達(dá)增加并出現(xiàn)向閏盤和細(xì)胞核內(nèi)的聚集，并一直持續(xù)到12、18月齡。提示FAK可能參與了高血壓所致的心肌重建和失代償性心