乙酸乙酯抑制小鼠實驗性急性肝衰竭及其作用機制的研究.pdf

1、本研究目的在于探討乙酸乙酯對D-氨基半乳糖/細菌脂多糖(GalN/LPS)誘導的小鼠實驗性小鼠急性肝衰竭的保護作用，并使用LPS激活的RAW264.7小鼠巨噬細胞深入探討其作用機制。
　　 建立小鼠急性肝衰竭模型，給受試昆明(KM)小鼠皮下注射(sc)生理鹽水、溶劑或乙酸乙酯（0.4 g/kg-l.0g/kg），30min后腹腔注射(iv) GalN/LPS(800mg/100μg)·kg-l連續(xù)觀察48h，記錄動物死亡情況。同

2、樣處理的另一組動物在腹腔注射GalN/LPS之后不同時間點th、2h、4h、8h、12h分別采集血清和肝臟樣本。測定血清中ALT、NO;肝臟樣本中NO;肝臟樣本行標準HE染色，觀察形態(tài)學變化。
　　 使用RAW264.7小鼠巨噬細胞建立細胞模型。使用不同劑量乙酸乙酯(100μmol/mL，125μmol/mL，150μmol/mL，175μmol/mL，200μmol/mL)對細胞進行預處理(30min)后，用LPS(800ng

3、/mL)對細胞進行刺激。在不同時間點采集樣本，使用Elisa法檢測乙酸乙酯抑制LPS誘導細胞產(chǎn)生TNF-、IL-ip、IL-6的狀況，使用化學比色法檢測iNOS的活性，以及使用Griess試劑法檢測NO的濃度，同時檢測相關炎性因子（TNF-、IL-1β、IL-6、COX-2、iNOS和IL-10）mRNA表達量的變化，以及抑制NFκB P65蛋白活化的情況。并且為驗證乙酸乙酯與RAW264.7細胞的結合速率以及乙酸乙酯作用時間與作用效果

4、的關系，而設定短時干預方案：預處理20min后，吸除剩余液體后，加入LPS進行刺激，在不同時間點采集樣本，測定樣本中的NO、TNF-，IL-1β，IL-6。
　　 小鼠經(jīng)乙酸乙酯預處理30min，可以顯著降低GalN/LPS誘導的小鼠急性肝衰竭造成的死亡率，與模型組比較24h死亡率從90.3％降低到19.0％。同時，乙酸乙酯預處理8h、12h時分別可以顯著降低小鼠血液及肝臟中NO的含量。在以谷丙轉氨酶和肝切片為指標評估肝損傷的結

5、果中，經(jīng)乙酸乙酯預處理的小鼠，其損傷程度顯著低于模型組。在肝切片中經(jīng)乙酸乙酯預處理的組織，其細胞結構、組織形態(tài)明顯優(yōu)于模型組。
　　 在細胞實驗中，乙酸乙酯預處理可以顯著抑制LPS誘導的TNF-、IL-1β、IL-6、iNOS和NO的生成，并且在一定濃度范圍內，其抑制效率與乙酸乙酯濃度成正比。使用實時熒光RT-PCR檢測乙酸乙酯175μmol/mL預處理下，TNF-、IL-1β、IL-6、iNOS和COX-2mRNA表達被顯著抑

6、制。免疫組化染色結果顯示，乙酸乙酯預處理可以抑制NFKB由胞質向胞核的轉移。短時處理結果顯示，乙酸乙酯短時處理(20min)仍可顯著抑制TNF-、IL-1β、IL-6和NO的產(chǎn)生。
　　 乙酸乙酯對GalN/LPS誘導小鼠的急性肝衰竭有顯著的抑制作用。其機制可能是抑制NFKB的活化，上調促炎因子，如TNF-、IL-1、IL-6等基因的表達、下調炎癥抑制因子如IL-10基因的表達，從而抑制促炎因子的生成。乙酸乙酯能顯著抑制LPS誘