新型血清髓過氧化物酶電化學免疫傳感器的研究.pdf

1、目的：
　　血清髓過氧化物酶(MPO)是由吞噬細胞受激活以后分泌產生的一種血紅素蛋白，是動脈粥樣硬化過程多個階段的潛在參與者。人類生物學和基因組學研究發(fā)現(xiàn)，血清MPO與心血管疾病密切相關，是心血管疾病風險強有力的獨立預測因子。與cTnI，Myo和CK-MB不同的是，MPO能預測早期心肌梗死及在隨后的1～6個月內發(fā)生嚴重心血管疾病的危險性。因此，MPO的檢測在ACS的早期臨床診斷中具有重要的意義。電化學免疫傳感器把電化學方法的靈敏性

2、和免疫反應的特異性有機的結合起來，通過換能器將生物信號轉化為電信號，從而廣泛的應用于臨床診斷領域。為了彌補現(xiàn)有MPO檢測方法的不足，旨在建立一種新型電化學免疫傳感器用于MPO的快速、靈敏檢測。
　　方法：
　　1.以離子液體為支持電解質，將鄰苯二胺(oPD)和多壁碳納米管(MWCNTs)原位電聚合到氧化銦錫(ITO)電極表面，形成PoPD-MWCNTs-IL復合物。
　　2.利用聚鄰苯二胺上含有的氨基基團，通過靜電作用

3、吸附納米金后固定MPO抗體。
　　3.利用牛血清蛋白封閉納米金上的非特異吸附位點，從而一種用于MPO檢測的新型電化學免疫傳感器構建完成。
　　4.通過循環(huán)伏安法(CV)和掃描電子顯微鏡(SEM)對電極修飾過程進行表征。
　　5.對實驗中鄰苯二胺單體的濃度、pH、孵育時間和孵育溫度等條件進行優(yōu)化，研究其對免疫傳感器性能的影響。
　　6.在最優(yōu)條件下，對MPO標準品進行檢測，繪制標準曲線，并對傳感器的選擇性、穩(wěn)定性、

4、重復性和準確性進行分析。
　　7.將電化學免疫傳感器與標準檢測方法進行方法學比較，通過對臨床標本的檢測，驗證其是否能應用于臨床。
　　結果：
　　1.SEM表征發(fā)現(xiàn)電極修飾成功，MPO抗體固定到了電極表面。循環(huán)伏安掃描發(fā)現(xiàn)anti-MPO/AuNCPs/PoPD-MWCNTs-il修飾的ITO電極在含1 mmol/L[Fe(CN)6]3+4-和0.1 mol/L KC1的PBS溶液(pH7.0)中電流響應較大，不同掃描

5、速度下，氧化還原峰電流值隨掃描速度的增加而逐漸增大，并與掃描速度的平方根成正比，說明電極表面的氧化還原反應受擴散控制。
　　2.當oPD濃度為0.05 mol/L，pH為7.0，孵育溫度為35℃和孵育時間20 min條件下，傳感器電流響應最好。在最佳條件下，免疫傳感器對MPO響應良好，MPO在0.2～23.4 ng/mL和23.4～300 ng/mL范圍內與電流I呈線性相關，回歸方程分別為：I=-0.4793 C+93.460，R

6、2=0.995：I=-0.0739 C+84.7023，R2=0.9983，經(jīng)計算得到檢出限為0.07 ng/mL。
　　3.該免疫傳感器在有和沒有干擾物質存在時，峰電流相差低于5.7％，將免疫傳感器在4℃下保存30天后進行檢測，結果發(fā)現(xiàn)響應電流與初始電流相比下降了8％批內、批問試驗結果分別為3.4％和4.7％，加標回收率在92.44％-103.2％之間。
　　結論：
　　1.通過原位電聚合技術制備的AuNPs/PoP