新型血清髓過氧化物酶電化學(xué)免疫傳感器的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  血清髓過氧化物酶(MPO)是由吞噬細胞受激活以后分泌產(chǎn)生的一種血紅素蛋白,是動脈粥樣硬化過程多個階段的潛在參與者。人類生物學(xué)和基因組學(xué)研究發(fā)現(xiàn),血清MPO與心血管疾病密切相關(guān),是心血管疾病風(fēng)險強有力的獨立預(yù)測因子。與cTnI,Myo和CK-MB不同的是,MPO能預(yù)測早期心肌梗死及在隨后的1~6個月內(nèi)發(fā)生嚴重心血管疾病的危險性。因此,MPO的檢測在ACS的早期臨床診斷中具有重要的意義。電化學(xué)免疫傳感器把電化學(xué)方法的靈敏性

2、和免疫反應(yīng)的特異性有機的結(jié)合起來,通過換能器將生物信號轉(zhuǎn)化為電信號,從而廣泛的應(yīng)用于臨床診斷領(lǐng)域。為了彌補現(xiàn)有MPO檢測方法的不足,旨在建立一種新型電化學(xué)免疫傳感器用于MPO的快速、靈敏檢測。
  方法:
  1.以離子液體為支持電解質(zhì),將鄰苯二胺(oPD)和多壁碳納米管(MWCNTs)原位電聚合到氧化銦錫(ITO)電極表面,形成PoPD-MWCNTs-IL復(fù)合物。
  2.利用聚鄰苯二胺上含有的氨基基團,通過靜電作用

3、吸附納米金后固定MPO抗體。
  3.利用牛血清蛋白封閉納米金上的非特異吸附位點,從而一種用于MPO檢測的新型電化學(xué)免疫傳感器構(gòu)建完成。
  4.通過循環(huán)伏安法(CV)和掃描電子顯微鏡(SEM)對電極修飾過程進行表征。
  5.對實驗中鄰苯二胺單體的濃度、pH、孵育時間和孵育溫度等條件進行優(yōu)化,研究其對免疫傳感器性能的影響。
  6.在最優(yōu)條件下,對MPO標準品進行檢測,繪制標準曲線,并對傳感器的選擇性、穩(wěn)定性、

4、重復(fù)性和準確性進行分析。
  7.將電化學(xué)免疫傳感器與標準檢測方法進行方法學(xué)比較,通過對臨床標本的檢測,驗證其是否能應(yīng)用于臨床。
  結(jié)果:
  1.SEM表征發(fā)現(xiàn)電極修飾成功,MPO抗體固定到了電極表面。循環(huán)伏安掃描發(fā)現(xiàn)anti-MPO/AuNCPs/PoPD-MWCNTs-il修飾的ITO電極在含1 mmol/L[Fe(CN)6]3+4-和0.1 mol/L KC1的PBS溶液(pH7.0)中電流響應(yīng)較大,不同掃描

5、速度下,氧化還原峰電流值隨掃描速度的增加而逐漸增大,并與掃描速度的平方根成正比,說明電極表面的氧化還原反應(yīng)受擴散控制。
  2.當oPD濃度為0.05 mol/L,pH為7.0,孵育溫度為35℃和孵育時間20 min條件下,傳感器電流響應(yīng)最好。在最佳條件下,免疫傳感器對MPO響應(yīng)良好,MPO在0.2~23.4 ng/mL和23.4~300 ng/mL范圍內(nèi)與電流I呈線性相關(guān),回歸方程分別為:I=-0.4793 C+93.460,R

6、2=0.995:I=-0.0739 C+84.7023,R2=0.9983,經(jīng)計算得到檢出限為0.07 ng/mL。
  3.該免疫傳感器在有和沒有干擾物質(zhì)存在時,峰電流相差低于5.7%,將免疫傳感器在4℃下保存30天后進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)響應(yīng)電流與初始電流相比下降了8%批內(nèi)、批問試驗結(jié)果分別為3.4%和4.7%,加標回收率在92.44%-103.2%之間。
  結(jié)論:
  1.通過原位電聚合技術(shù)制備的AuNPs/PoP

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