髓過氧化物酶誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞凋亡的分子機制.pdf

1、目的：探討髓過氧化物酶誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞凋亡的分子機制。
　　 方法：
　　 1.用不同濃度(0.1u/ml，0.2u/ml，0.4u/ml，0.6u/ml)的髓過氧化物酶干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC-12），采用MTT比色法觀察各組的細胞生長抑制率，采用流式細胞術(shù)檢測各組的細胞凋亡率。
　　 2.采用逆轉(zhuǎn)錄PCR、Real-time PCR檢測內(nèi)皮細胞caspase-3、baxmRNA的表達。逆轉(zhuǎn)錄PCR

2、用灰度分析儀測量各灰度值，計算各灰度值與內(nèi)參(GAPDH)灰度值之比;Real-time PCR采用比較閾值法計算不同干預(yù)組與陰性對照組相比的相對表達量。
　　 3.采用western-blot法檢測內(nèi)皮細胞caspase-3、bax蛋白的表達。用灰度分析儀測量各條帶灰度值，計算各灰度值與內(nèi)參(β-actin)灰度值之比。
　　 結(jié)果：
　　 1.HUVEC-12細胞生長抑制率及凋亡率的變化:與陰性對照組相比，0

3、.4 u/ml MPO干預(yù)組、0.6 u/ml MPO干預(yù)組和陽性對照組HUVEC-12細胞生長抑制率明顯升高（P＜0.05），0.2u/ml干預(yù)組、0.4u/ml MPO干預(yù)組、0.6 u/ml MPO干預(yù)組的內(nèi)皮細胞凋亡率明顯升高(P＜0.05); MPO對內(nèi)皮細胞生長的抑制以及誘導(dǎo)凋亡的作用具有濃度依賴性（P＜0.05）。
　　 2.HUVEC-12細胞caspase-3 mRNA及蛋白的表達:與陰性對照組相比，較高濃度（

4、逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測的濃度為0.4u/ml、0.6u/ml，Real-time PCR為0.2 u/ml、0.4 u/ml和0.6 u/ml）MPO干預(yù)組和陽性對照組HUVEC-12細胞caspase-3 mRNA表達明顯升高(P＜0.05)。與陰性對照組相比，0.4 u/ml MPO干預(yù)組、0.6 u/ml MPO干預(yù)組和陽性對照組內(nèi)皮細胞caspase-3前體片段蛋白表達明顯降低(P＜0.05)，caspase-3的活化片段蛋白表達明顯

5、升高(P＜0.05)。且MPO誘導(dǎo)caspase-3 mRNA及蛋白的表達具有濃度依賴性(P＜0.05)。
　　 3.HUVEC-12細胞bax mRNA及蛋白的表達:與陰性對照組相比，較高濃度（逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測的濃度為0.4u/ml、0.6u/ml，Real-timePCR為0.2 u/ml、0.4 u/ml和0.6 u/ml）MPO干預(yù)組和陽性對照組HUVEC-12細胞bax mRNA表達明顯升高(P＜0.05)。與陰性對照

6、組相比，0.4 u/ml MPO干預(yù)組、0.6 u/ml MPO干預(yù)組和陽性對照組內(nèi)皮細胞bax蛋白表達明顯升高(P＜0.05)。且MPO誘導(dǎo)bax mRNA及蛋白的表達具有濃度依賴性（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.一定濃度的髓過氧化物酶可以誘導(dǎo)HUVEC-12內(nèi)皮細胞凋亡，且在特定濃度范圍內(nèi)具有濃度依賴性。
　　 2.髓過氧化物酶誘導(dǎo)的HUVEC-12內(nèi)皮細胞凋亡可能是通過激活caspase-3信號