小劑量辣椒素對大鼠內(nèi)臟機(jī)械及化學(xué)刺激敏感性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過檢測大鼠在不同時期攝食小劑量辣椒素(capsaicin，CAP)，對內(nèi)臟機(jī)械和化學(xué)刺激的敏感性，胃十二指腸組織內(nèi)辣椒素受體(transientreceptor potential vanilloid，TRPV1)的表達(dá)，胃、十二指腸粘膜屏障的變化，探討大鼠攝食小劑量辣椒素對內(nèi)臟機(jī)械及化學(xué)刺激敏感性的影響及機(jī)制。
　　方法:(1) CAP飼料的配制:50％ CAP2mg，加入到普通飼料粉100g，混勻，即得到CAP濃度為1

2、0mg/Kg的CAP飼料。(2)實驗動物及分組:SD大鼠160只，隨機(jī)分為實驗組（A組）與對照組（B組），每組80只，雌雄各半。A組攝食CAP飼料，CAP1 mg/kg/d，B組攝食普通飼料。為了探索CAP在不同時期對大鼠內(nèi)臟機(jī)械和化學(xué)刺激的影響，實驗分為5期，按相應(yīng)時期，A組與B組各分為5個小組，每組16只，雌雄各半。具體分期及時間:Ⅰ期:1天，實驗組（A1組）:攝食CAP飼料，完成后給予普通飼料，自由進(jìn)水;對照組（B1組）:自由攝食

3、進(jìn)水;Ⅱ期:3天，實驗組（A2組）:攝食CAP飼料，完成后給予普通飼料，自由進(jìn)水;對照組（B2組）:自由攝食進(jìn)水;Ⅲ期，1周:實驗組（A3組）:攝食CAP飼料，完成后給予普通飼料自由進(jìn)水;對照組（B3組）:自由攝食進(jìn)水;Ⅳ期:2周，實驗組（A4組）:攝食CAP飼料，完成后給予普通飼料，自由進(jìn)水;對照組（B4組）:自由攝食進(jìn)水。Ⅴ期:4周，實驗組(A5組):攝食CAP飼料，完成后給予普通飼料，自由進(jìn)水;對照組（B5組）:自由攝食進(jìn)水。(3

4、)內(nèi)臟機(jī)械刺激敏感性測定:采用直腸擴(kuò)張試驗(rectaldistention test，RDT):誘導(dǎo)大鼠排盡直腸內(nèi)糞便，石蠟油涂抹肛周，10FR導(dǎo)尿管氣囊端緩慢置入大鼠直腸，膠布固定于尾部，用5ml空針緩慢向氣囊內(nèi)勻速注氣，邊注氣邊觀察大鼠腹部撤離反射(abdominal withdrawalreflex，AWR)，直到大鼠行為達(dá)到AWR評分的4分，結(jié)束注氣。(4)內(nèi)臟化學(xué)刺激敏感性測定:采用腹腔注射新斯的明的方法:用1ml注射器向腹

5、腔內(nèi)注射濃度為60ug/ml新斯的明注射液，劑量為120ug/Kg，觀察大鼠AWR行為，記錄大鼠出現(xiàn)AWR評分3-4分的行為的開始時間及持續(xù)時間。(5)檢測指標(biāo)及方法:①實驗過程中大鼠一般情況。②機(jī)械刺激的氣囊擴(kuò)張體積，各組大鼠行RDT，直到大鼠行為達(dá)到AWR評分的4分。③腹腔注射新斯的明大鼠出現(xiàn)AWR評分3-4分行為的開始時間及持續(xù)時間。④胃、十二指腸組織內(nèi)TRPV1的表達(dá)情況:用免疫組化方法進(jìn)行TRPV1的檢測。⑤胃、十二指腸粘膜屏

6、障的檢測:各組大鼠脫臼處死，沿胃大彎剪開胃及十二指腸后用生理鹽水將胃內(nèi)容物沖洗干凈，肉眼觀察粘膜形態(tài)，采用Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評分評定胃、十二指腸粘膜損傷情況;并取距幽門約1cm處胃大彎側(cè)組織3塊，十二指腸組織3塊，送病理組織學(xué)檢查，光鏡下對HE染色后胃、十二指腸組織進(jìn)行觀察。
　　結(jié)果:(1)大鼠一般情況:實驗過程中，實驗組及對照組大鼠均精神狀態(tài)良好，行動靈活，食欲佳，皮毛光滑，大小便正常，體重增加。(2)機(jī)械刺激的氣囊擴(kuò)張體積(m

7、l):Ⅰ期、Ⅱ期實驗組與對照組之間均無顯著差異(P＞0.05);但A2組中雄性大鼠的氣囊擴(kuò)張體積（2.24±0.13）顯著小于B2組中雄性大鼠（2.56±0.21）(P＜0.05)。Ⅲ期實驗組氣囊擴(kuò)張體積（1.91±0.33）顯著小于對照組（2.30±0.30）(P＜0.05)，且實驗組中雌性氣囊擴(kuò)張體積顯著小于雄性（1.68±0.10 vs2.15±0.30，P＜0.05）。Ⅳ期實驗組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。Ⅴ期實驗

8、組氣囊擴(kuò)張體積（2.85±0.33）顯著大于對照組（2.40±0.53）(P＜0.05)。(3)腹腔注射新斯的明大鼠出現(xiàn)AWR評分3-4分行為的開始時間及持續(xù)時間:①開始時間(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期實驗組與對照組之間均無顯著差異(P＞0.05);Ⅴ期實驗組AWR評分達(dá)到3-4分的開始時間較對照組顯著延長(5.91±1.74 vs4.49±1.53P＜0.05)。②持續(xù)時間(min):Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅳ期、Ⅴ期實驗組與對照組之間無顯

9、著差異(P＞0.05);Ⅲ期實驗組AWR評分達(dá)到3-4分的持續(xù)時間較對照組顯著延長（6.30±3.16 vs3.13±1.16 P＜0.05）。(4)胃、十二指腸TRPV1的表達(dá)結(jié)果:①胃黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期實驗組大鼠TRPV1的PI值（1.97±0.46）顯著高于對照組（1.60±0.25）(P＜0.05)，Ⅱ期實驗組大鼠TRPV1的PI值（2.14±0.54）顯著高于對照組（1.63±0.51）(P＜0.05)，Ⅲ期

10、實驗組大鼠TRPV1的PI值（2.16±0.44）顯著高于對照組（1.65±0.43）(P＜0.05);Ⅳ期、Ⅴ期實驗組與對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。②十二指腸黏膜TRPV1光密度(PI)值:Ⅰ期實驗組大鼠TRPV1的PI值（1.87±0.38）顯著高于對照組（1.60±0.25）(P＜0.05)、Ⅱ期實驗組大鼠TRPV1的PI值（1.80±0.44）顯著高于對照組（1.61±0.31）(P＜0.05)，Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期

11、實驗組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。(5)胃、十二指腸粘膜屏障的檢測:肉眼觀察:所有實驗組及對照組大鼠胃、十二指腸粘膜光滑，無明顯異常。病理學(xué)觀察:所有標(biāo)本粘膜完整無損，絨毛排列整齊，組織結(jié)構(gòu)完整，無炎性細(xì)胞浸潤。
　　結(jié)論:1.大鼠攝入小劑量CAP連續(xù)1周對內(nèi)臟機(jī)械刺激的敏感性顯著增加，連續(xù)2周敏感性逐漸恢復(fù)至正常，連續(xù)4周敏感性顯著降低。2.大鼠攝入小劑量CAP連續(xù)1周對內(nèi)臟化學(xué)刺激的敏感性顯著增加，連續(xù)4周，敏感