辣椒素對內(nèi)臟高敏感大鼠胃動力影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察不同劑量的辣椒素（CAP）對內(nèi)臟高敏感大鼠胃核素排空率、胃竇肌間神經(jīng)叢降鈣素基因相關肽（CGRP）和P物質(zhì)（P，SP）、血漿胃動素（MTL）和胃粘膜屏障的影響，探討不同劑量的CAP對內(nèi)臟高敏感大鼠胃動力的影響及其機制。 方法：①實驗動物分組：60只SD大鼠，雌雄不拘，體重180g～200g之間，隨機分為A組（正常對照組）、B組（空白模型組）、C1組（CAP1組）、C2組（CAP2組）及C3組（CAP3組），每組大鼠

2、12只。②內(nèi)臟高敏感大鼠模型的建立：大鼠適應性飼養(yǎng)2w，自由進食進水。造模方法：A組腹腔注射生理鹽水，1ml/鼠；B組、C1組、C2組和C3組大鼠腹腔注射雞卵清白蛋白（chicken egg albumin），1ml/鼠，制備內(nèi)臟高敏感大鼠模型。造模過程中觀察大鼠一般情況。2w后取A組全部大鼠12只組成對照組，隨機從B組、C1組、C2組和C3組中抽取共15只大鼠組成模型組用于肛門直腸擴張（CRD）以觀察大鼠腹部撤離反射（AWR），并用A

3、WR評分評估大鼠對直腸擴張刺激的內(nèi)臟感覺改變。③CAP的使用方法及劑量：大鼠造模成功后進行CAP治療實驗，具體方法如下：A組：自由進食進水，生理鹽水10mL/kg/d灌胃，分成2次，連續(xù)2w；B組：自由進食進水，生理鹽水10mL/kg/d灌胃，分成2次，連續(xù)2w；C1組：自由進食進水，CAP1mg/kg/d灌胃，灌胃容積為10mL/kg/d，分成2次，連續(xù)2w；C2組：自由進食進水，CAP5mg/kg/d灌胃，灌胃容積為10mL/kg/

4、d，分成2次，連續(xù)2w；C3組：自由進食進水，CAP20mg/kg/d灌胃，灌胃容積為10mL/kg/d，分成2次，連續(xù)2w。從灌胃的第14d起，所有大鼠開始禁食、不禁藥，于次日晨末次灌藥禁水2h后，立即灌入配制好的高锝酸鈉核素溶液，1mL/鼠（1mL的生理鹽水中含高锝酸鈉0.2mci）。④檢測指標及方法：造模及給藥過程中觀察大鼠的一般情況；胃核素排空率檢測：灌入核素溶液0.5h后，用質(zhì)量分數(shù)為2%的戊巴比妥鈉（40mg/kg）腹腔注射

5、麻醉，打開腹腔，結扎食管胃連接部和幽門部，將整個胃取出，剪開胃并用生理鹽水清洗胃內(nèi)容物，收集清洗液用于測定胃核素排空率；胃竇肌間神經(jīng)叢CGRP、SP表達情況：取各組大鼠胃竇組織（約0.5cm×0.5cm）全層一塊，立刻置于4%的多聚甲醛中充分固定2h，石蠟包埋，連續(xù)5μm切片，用免疫組化染色方法分別進行CGRP、SP染色；血漿MTL：心臟采血2ml，4℃離心后提取上清液，用放射免疫法檢測血漿MTL水平的變化；胃粘膜屏障改變：把清洗過胃內(nèi)

6、容物之后的胃置于4%的多聚甲醛中充分固定后，肉眼觀察胃粘膜形態(tài)，采用Guth標準改良評分評定胃粘膜損傷情況，并取胃粘膜組織送病理組織學檢查，光鏡下對HE染色后的胃粘膜進行觀察。 結果：⑴動物一般情況：造模過程中，A組大鼠精神狀態(tài)好，行動靈活，食欲佳，皮毛光澤，大小便正常，體重增加；B組、C1組、C2組、C3組大鼠出現(xiàn)好斗，易激惹，互相撕咬等情況，但無死亡。隨著CAP治療時間延長，C1組、C2組、C3組大鼠好斗、激惹、互相撕咬情況

7、減少，而B組大鼠無明顯減少。在灌胃過程中C1組有5只大鼠、C2組有5只大鼠、C3組有6只大鼠曾出現(xiàn)嗆咳，但均無窒息和死亡。⑵AWR評分結果：模型組注水1ml、3ml和5ml的AWR評分分別為：0.53±0.52分、2.53±0.52分、3.40±0.63分，對照組注水1ml、3ml和5ml的AWR評分分別為：0.67±0.50分、1.44±0.53分、2.56±0.53分。隨著氣囊體積的增加，對照組和模型組AWR評分值逐漸遞增。模型組注

8、水3ml和5ml氣囊擴張時AWR評分均顯著高于對照組（P<0.05）。⑶胃核素排空率的變化：各組大鼠的胃核素排空率分別為：A組52.82%±4.50%，B組38.70%±2.92%，C1組61.17%±2.14%，C2組71.18%±6.73%，C3組77.53%±5.98%。其中A組大鼠胃核素排空率顯著高于B組（P<0.05）；A組大鼠胃核素排空率顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）、C3組（P<0.05）；B組大鼠

9、胃核素排空率顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）、C3組（P<0.05）；并且隨著CAP劑量增加，C3組和C2組胃核素排空率顯著高于C1組（P<0.05），且C3組胃核素排空率也顯著高于C2組（P<0.05）。⑷胃竇肌間神經(jīng)叢內(nèi)CGRP及SP的表達情況：大鼠胃竇肌間神經(jīng)叢內(nèi)CGRP表達水平分別為：A組為2.83±0.39分，B組為2.67±0.49分，C1組為2.25±0.45分，C2組為1.83±0.57分，C3組為

10、1.42±0.51分，其中B組CGRP表達水平與A組相比無顯著性差異，A組CGRP表達水平顯著高于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）和C3組（P<0.05），B組CGRP表達水平也顯著高于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）和C3組（P<0.05）；隨著CAP劑量的增加，C2組CGRP表達水平顯著低于C1組（P<0.05），C3組CGRP水平也顯著低于C2組（P<0.05）。大鼠胃竇肌間神經(jīng)叢內(nèi)SP表達水平分別為：

11、A組為1.83±0.57分，B組為1.33±0.49分，C1組為2.33±0.49分，C2組為2.83±039分，C3組為3.50±0.52分，其中B組SP表達水平較A組顯著下降（P<0.05）；A組SP表達水平顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）和C3組（P<0.05），B組SP表達水平顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）和C3組（P<0.05）；C2組SP表達水平顯著高于C1組（P<0.05），C

12、3組SP表達水平相比著高于C2組（P<0.05）。⑸血漿MTL的變化：大鼠血漿MTL水平分別為：A組284.21±21.65pg/ml，B組237.59±13.19 pg/ml，C1組414.35±11.55 pg/ml，C2組451.18±37.80 pg/ml，C3組231.64±11.67 pg/ml。其中B組MTL水平較A組顯著降低（P<0.05）；A組MTL顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05），B組MTL水平

13、也顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05），且C2組MTL水平相比顯著高于C1組（P<0.05），而C3組的血漿MTL水平顯著低于C1組（P<0.05）、C2組（P<0.05）。⑹胃粘膜屏障：A組、B組、C1組、C2組及C3組的胃粘膜損傷評分（Guth標準改良評分）比較各組間無顯著性差異（P>0.05）；光鏡下觀察胃粘膜組織病理學改變：A組、B組、C1組、C2組大鼠胃粘膜基本光滑，上皮細胞形態(tài)正常，排列整齊，未見粘膜脫落、

14、充血、水腫、炎性細胞浸潤及腺體結構紊亂和壞死。C3組大鼠胃粘膜上皮細胞輕度脫落、充血、水腫，未見腺體結構紊亂和壞死。對胃粘膜病理損傷程度進行半定量統(tǒng)計，病理損傷積分A組為0.25±0.45分，B組為0.17±0.39分，C1組為0.32±0.45分，C2組為0.33±0.47分，C3組為0.83±0.72分。其中C3組病理損傷積分顯著高于A組（P<0.05）、B組（P<0.05）、C1組（P<0.05）和C2組（P<0.05）。

15、 結論：①腹腔注射雞卵清白蛋白可成功建立大鼠內(nèi)臟高敏感模型。②CAP1mg/kg/d、5mg/kg/d及20mg/kg/d連續(xù)灌胃2w可促進內(nèi)臟高敏感大鼠的胃核素排空率，并且隨著灌胃劑量的增加，促胃排空效應增強。③CAP影響內(nèi)臟高敏感大鼠的胃排空可能通過調(diào)節(jié)胃竇肌間神經(jīng)叢CGRP、SP的表達而發(fā)揮作用。④CAP影響內(nèi)臟高敏感大鼠的胃排空可能與MTL有關。⑤CAP1mg/kg/d和5mg/kg/d連續(xù)灌胃對正常大鼠的胃粘膜屏障無損傷作用，