Synbindin蛋白和eIF4G家族中p97-CTD的結構生物學研究.pdf

1、TRAPP((transportproteinparticle)復合物是真核生物細胞內(nèi)參與細胞內(nèi)膜泡與細胞膜tethering過程的蛋白復合物，在細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有TRAPPⅠ和TRAPPⅡ兩種形式，其中BET3p，BET5p，Trs20p，Trs23p，Trs31p，Trs33p，Trs85p是共有的，而Trs65p，Trs120p，Trs130p是TRAPPⅡ所特有的，其中TRAPPⅠ結合在從內(nèi)質網(wǎng)運輸?shù)礁郀柣w的膜泡上，而TRAPPⅡ參

2、與高爾基體內(nèi)部的運輸。我們所研究的Synbindin蛋白是TRAPP復合物中Trs23p在人體中的同源蛋白，最先通過酵母雙雜交法在人體海馬趾神經(jīng)細胞中發(fā)現(xiàn)，通過與Syndecan-2的胞內(nèi)部分相互作用，從而參與神經(jīng)樹突的形成。我們克隆了該蛋白的基因，在大腸桿菌中得到過量表達，在純化和結晶該蛋白后，根據(jù)Se-MAD法解析了該蛋白的2.8埃的晶體結構；由于該蛋白晶體結構中的PDZ類似結構域活動性較強，導致該區(qū)域的電子密度較差，為了獲得詳細的

3、PDZ類似結構域的結構信息，我們又單獨克隆、表達了該結構域，純化后獲得該結構域的核磁結構。 Synbindin的結構包括兩個結構域：位于N端的類似PDZ結構域和位于C端的Longin結構域即五個反平行的β折疊片位于中間，兩側包括一個N端的α螺旋，和C端的兩個反平行的α螺旋組成。從晶體結構中，我們觀察到位于Synbindin中其Longin結構域插入了位于N端的PDZ類似結構域，這是目前所有已知Longin結構域中首次發(fā)現(xiàn)。而且

4、這個PDZ類似結構域在結構上和典型的PDZ結構域有一定的差異，通過Syndecan-2胞內(nèi)部分與APD之間的SPR、ITC、核磁滴定實驗，發(fā)現(xiàn)其和Syndecan-2胞內(nèi)部分的結合能力較弱。通過對Synbindin晶體結構分析和TRAPP復合物中其他組成單位結構比較，我們提出了Longin結構域之間的可能的結合模式。 真核細胞mRNA的翻譯的開始是一個復雜的調控過程，這需要很多蛋白的參與，這些蛋白稱為真核起始因子(eukary

5、oticinitiationfactor)，簡稱eIF。這中間eIF4G是一個結構蛋白，它可以結合eIF4A和eIF4E形成大的復合物eIF4F。eIF4G還可以募集eIF3，然和結合到核糖體的小亞基上。除此之外，eIF4G還可以結合PABP和Mnkl蛋白。 P97蛋白(又稱為DAP5)，是和eIF4G的中間和C末端同源的，在翻譯起始過程中起到調節(jié)作用的蛋白。它可能是作為eIF4G的迷你分子的形式存在，起到調節(jié)eIF4G功能的