MMP-9、AQP-1、AQP-5在胰蛋白酶導致的急性肺損傷中的表達及意義.pdf

1、目的：通過建立胰蛋白酶導致的急性肺損傷（Acute lung injury，ALI）模型，觀察基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases-9，MMP-9）和水通道蛋白-1（Aquaporin-1，AQP-1）、水通道蛋白-5（Aquaporin-5，AQP-5）在肺組織中的表達變化情況，探討MMP-9和AQP-1、AQP-5蛋白在胰蛋白酶導致的急性肺損傷中的意義。
　　方法：48只健康成年雄性Sprag

2、ue-Dawley（SD）級大鼠隨機分成2組，即對照組（生理鹽水注射組）、模型組（胰蛋白酶注射組，即ALI組），每組24只，每組再隨機分成3小時（hour，h）組、6h組、12h組、24h組，每時間組6只。模型組采用大鼠尾靜脈持續(xù)注射胰蛋白酶（Trysin）（15000U/Kg/h）2小時制備急性肺損傷大鼠模型；對照組采用大鼠尾靜脈注射等量的生理鹽水。觀察兩組大鼠靜脈注射后的一般情況；兩組大鼠分別于造模成功后3h、6h、12h、24h各

3、時間點采取腹主動脈血1ml，檢測動脈血氣分析PO2、PCO2；并于各時間點腹主動脈取血處死大鼠，取肺臟計算肺濕干重比（wet/dry weight ratio，W/D），行蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色，光學顯微鏡下觀察肺組織的病理改變，通過免疫組織化學染色和Western blotting方法觀察肺組織MMP-9和AQP-1、AQP-5蛋白的表達變化，并通過實時熒光定量PCR方法檢測MMP-9mRNA和A

4、QP-1mRNA、AQP-5mRNA在肺組織中的表達變化。
　　結果：
　　1.生理鹽水注射組存活率100％，胰蛋白酶注射組存活率78%；生理鹽水注射組各時間點動脈血氣、肺W/D值及肺組織病理基本正常。胰蛋白酶注射組各時間點動脈血PO2明顯下降、PCO2顯著升高（P＜0.05），且隨時間延長下降、增高趨勢愈發(fā)明顯；胰蛋白酶注射組各時間點肺W/D值較生理鹽水注射組顯著增高（P＜0.05），并隨著時間推移，W/D值逐漸增高；胰蛋

5、白酶注射組各時間點肺組織損傷較生理鹽水注射組明顯加重：肺組織出現(xiàn)充血、水腫、滲出，肺泡壁破裂，肺間質(zhì)充血、水腫、明顯增寬，肺泡和肺間質(zhì)中大量的炎性細胞浸潤，且損傷程度隨時間延長而逐漸加重。
　　2.通過免疫組織化學染色和Western blotting方法檢測發(fā)現(xiàn)，與生理鹽水注射組比較，胰蛋白酶注射組肺組織MMP-9蛋白的表達自3h開始呈逐漸增加趨勢（P＜0.05）；AQP-1、AQP-5蛋白的表達在3h前無明顯變化（P＞0.05

6、），但6h后表達明顯減少（P＜0.05）。
　　3.通過實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與生理鹽水注射組比較，胰蛋白酶注射組肺組織MMP-9mRNA的表達水平自3h開始明顯升高，12h時達峰值，24h后開始下降（P＜0.05）；AQP-1mRNA、AQP-5mRNA的表達在3h前無明顯變化，但6h后表達逐漸下降（P＜0.05）。
　　結論：
　　1.胰蛋白酶本身可造成急性肺損傷，是重癥急性胰腺炎時胰腺外器官特別是肺臟器官損

7、傷的重要原因。
　　2.胰蛋白酶導致的急性肺損傷早期肺組織MMP-9蛋白高表達，充分降解肺毛細血管外基膜，使肺毛細血管外基膜連續(xù)性中斷，肺毛細血管內(nèi)皮通透性增加，是胰蛋白酶導致的急性肺損傷早期肺水腫的主要機制之一。
　　3.胰蛋白酶導致的急性肺損傷早期肺組織AQP-1、AQP-5蛋白的表達無明顯變化，提示AQP-1、AQP-5蛋白可能不是胰蛋白酶導致的急性肺損傷早期肺水腫的主要機制；但在胰蛋白酶導致的急性肺損傷后期，AQP-