MMP-7、MMP-9及TIMP-1在喉癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：喉癌占全身癌腫的1％-5％。腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，也是影響預(yù)后的決定性因素，所以腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究成為近年來研究的熱點(diǎn)。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)就是腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物之一。 MMPs是細(xì)胞分泌的一組Zn++依賴性蛋白酶，在生理環(huán)境中能達(dá)到其高活性，可消化細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)及基底膜(basementmembranes，BM)的所有成分。MMP-7是一種基質(zhì)溶解

2、酶，具有高度蛋白溶解能力及廣泛的底物特異性，可激活多種ECM，并在腫瘤血管形成中發(fā)揮重要作用；MMP-9參與ECM的降解與重建，故義稱基質(zhì)因子。MMP-7和MMP-9的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。MMPs存在特異性抑制因子基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(TissueInhibitorMetalloproteinase，TIMPs)。TIMPs可與MMPs形成1∶1復(fù)合體MMP-TIMP，從而抑制其活性。但到目前為止，關(guān)于TIMPs與腫

3、瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移的關(guān)系，目前國內(nèi)外的研究結(jié)果還不一致。有的研究表明TIMPs的表達(dá)水平與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移具有明顯的負(fù)相關(guān)性，也有許多研究表明，TIMPs的超表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移行為呈正相關(guān)。 本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測喉癌組織、癌旁組織及正常喉粘膜組織中MMP-7、MMP-9及TIMP1的表達(dá)，探討此三種蛋白在喉癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)性，尋找可能預(yù)測喉癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，用以指導(dǎo)

4、臨床。 方法： 1.材料選擇2004年11月-2005年11月，于河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院耳鼻喉-頭頸外科住院手術(shù)治療的50例原發(fā)喉癌患者新鮮手術(shù)切除癌組織及50例相應(yīng)癌旁組織(距腫瘤邊緣0.5cm)與非喉部疾病患者的正常喉黏膜組織16例。所有組織取材后即用70％酒精固定，40c冷藏保存。 2.FCM方法一抗：鼠抗人基質(zhì)金屬蛋白酶7單克隆抗體(IgG2b)；羊抗人基質(zhì)金屬蛋白酶9單克隆抗體(C-20)；鼠抗人金屬

5、蛋白酶組織抑制因予1單克隆抗體(IgM)。二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗體。 3.結(jié)果判定MMP-7、MMP-9及TIMP-1表達(dá)的蛋白定量分析：以熒光指數(shù)(FI)表示三種蛋白表達(dá)的相對含量。公式如下： 均道值=1ogX-mode×340FI=實(shí)驗(yàn)樣品的均道值/對照樣品的均道值 陽性結(jié)果的判定：腫瘤組織的FI值大于正常組織細(xì)胞的-XF1±2S為陽性(TIMP-1FI＞0.74，MMP-9＞1.06，MMP-7＞0

6、.88)，反之為陰性。 4.統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excell數(shù)據(jù)庫整理，應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析，Q檢驗(yàn)，t、t’檢驗(yàn)，X2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher精確計(jì)算和多元回歸分析。以P≤0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，P≤0.01為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著性意義。 結(jié)果： 1MMP-9的表達(dá) MMP-9在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=1.24)明顯高于癌旁組織(FI=1.05)(P=0.024)和正常粘

7、膜組織(FI=1.00)(P=0.000)。喉癌組織中的陽性表達(dá)率(100％)也高于癌旁組織(72％)(P=0.001)和正常粘膜組織(0％)(P=0.000)，均具有非常顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.088)。 喉癌組織中，MMP-9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N+)的表達(dá)量(FI=1.42)和陽性表達(dá)率(100％)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N0)(FI=1.17)(p=0.000)，(72％)(p=

8、0.070)相比，N+組的表達(dá)量明顯高于N0組，具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，定性表達(dá)兩組沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MMP-9在不同臨床分期、臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量和陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2MMP-7的表達(dá) MMP-7在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=1.25)明顯高于癌旁組織(FI=1.03)(P=0.000)及正常喉粘膜組織(FI=1.00)(P=0.000)，喉癌組織中的陽性表達(dá)率(80％)也高于癌旁組織(2％)，(P

9、=0.001)和正常粘膜(0％)(P=0.001)均具有非常顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 喉癌組織中，MMP-7在N+組的表達(dá)量(FI=1.31)和陽性表達(dá)率(100％)與N0組的表達(dá)量(FI=1.22)和陽性表達(dá)率(72％)相比，定量表達(dá)有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=8.019，P=0.000)，N+組中表達(dá)量高于N0組，但陽性表達(dá)率兩組無明顯差異(X2=3.280，P=0.070)。MM

10、P-7在不同臨床分期、臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量和陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3TIMP-1的表達(dá) TIMP-1在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=0.85)及陽性表達(dá)率(56％)明顯低于癌旁組織中的表達(dá)量(FI=0.97)(t=12.393，P=0.000)及陽性表達(dá)率(84％)(X2=9.333，P=0.002)和正常喉粘膜組織(FI=1.00)(t=-3.189，P=0.003)及陽性表達(dá)率(88％)(X2=5.198

11、，P=0.023)，均具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異或顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；癌旁組織和正常喉粘膜組織間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 喉癌組織中，TIMP-1在N+組的表達(dá)量(FI=0.78)和陽性表達(dá)率(0％)與N0組的表達(dá)量(FI=0.88)及陽性表達(dá)率(78％)相比，N+組中表達(dá)量和陽性表達(dá)率均明顯低于N0組。表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=-1.9202，P=0.021)，陽性表達(dá)率有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(X2=24.747，P=0.001)。在

12、臨床Ⅰ、Ⅱ期組的表達(dá)量(FI=0.90)和陽性表達(dá)率(75％)與臨床Ⅲ、Ⅳ期組(FI=0.75)和陽性表達(dá)率(22％)相比，表達(dá)量(t=-2.083，P=0.020)具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，陽性表達(dá)率(X2=24.747，P=0.001)，具有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達(dá)量及陽性表達(dá)率明顯低于臨床Ⅰ、Ⅱ期組。TIMP-1在不同臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量和陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4以喉癌組織中MMP-9和MMP-7

13、的表達(dá)為自變量，TIMP-1的表達(dá)為因變量，進(jìn)行多元線性回歸分析，三者間表達(dá)無相關(guān)性。 結(jié)論： 1MMP-9、MMP-7及TIMP-1在喉癌組織、癌旁組織及正常喉粘膜組織中均有表達(dá)。 2MMP-9、MMP-7在喉癌組織中的定量及定性表達(dá)均高于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的表達(dá)無差別。 3TIMP-1在喉癌組織中的定量及定性表達(dá)均低于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的

14、表達(dá)無差別。 4TIMP-1在喉癌組織中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和臨床Ⅲ、Ⅳ期組的定量及定性表達(dá)分別低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和臨床Ⅰ、Ⅱ期組；但其表達(dá)與臨床分型、患者年齡幾患者性別無關(guān)。 5MMP-9及MMP-7在喉癌組織中的定量表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，定性表達(dá)在兩組間均無差別；兩者定量及定性表達(dá)與臨床分期、臨床分型、患者年齡及性別均無關(guān)。 6MMP-9