姜黃素對(duì)大鼠急性肺損傷中MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　觀察姜黃素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷中 MMP-9表達(dá)的影響,探討姜黃素治療急性肺損傷的分子生物學(xué)機(jī)制,為姜黃素的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采取隨機(jī)對(duì)照研究,以90只SD雄性大鼠為研究對(duì)象,用脂多糖腹腔注射制備急性肺損傷模型。
　　2.實(shí)驗(yàn)分為五組,分別為A組:正常對(duì)照組(NS組);B組:溶媒組(DMSO組);C組:模型組(LPS組);D組:姜黃素低劑量處理組(LPS+CMN100

2、mg/kg組);E組:姜黃素高劑量處理組(LPS+CMN200mg/kg組)。每組18只,每組再分為3個(gè)時(shí)間點(diǎn)亞組:即2h、6h、12h亞組,每個(gè)亞組6只(n=6)。
　　3.A組大鼠都給予3ml/kg生理鹽水腹腔注射;B組先注射1ml/kgDMSO后再注入2ml/kg生理鹽水;C組腹腔注射LPS(5mg/kg);D組先注射LPS,30min后腹腔注射100mg/kg CMN;E組先注射LPS,30min后腹腔注射200mg/kg

3、 CMN。以LPS注射時(shí)間點(diǎn)為0h,每組取2h、6h、12h共3個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn),在給藥后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀察各組動(dòng)物的一般情況,然后處死各組動(dòng)物,取肺組織進(jìn)行HE染色,抽取腹主動(dòng)脈血檢測(cè)PaO2及PaO2/FiO2,光鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化并測(cè)定肺濕/干重比評(píng)估肺水腫情況,免疫組化和RT-PCR分別測(cè)定MMP-9蛋白及mRNA的表達(dá),觀察姜黃素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷中MMP-9表達(dá)的影響。
　　4.統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS1

4、3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±S)的形式表示,各組之間比較用單因素方差分析(One way ANOVA),方差齊時(shí)兩組之間比較采用 S-N-K檢驗(yàn),方差不齊者用Games-Howell檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.急性肺損傷動(dòng)物模型制備成功。模型組大鼠一般情況差,被毛松散蓬亂,兩眼無(wú)神,活動(dòng)遲鈍,進(jìn)食量少,喜扎堆,唇及爪紫紺,并且出現(xiàn)呼吸困難。肺組織大體觀察表現(xiàn)為顏

5、色暗紅,體積增大,表面散在有大小不一的紅色斑點(diǎn),切面疏松,有淡紅色液體溢出,肺水腫。光鏡下可見(jiàn)肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血,氣管及血管周?chē)胁煌潭鹊乃[,肺內(nèi)可見(jiàn)小灶狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn),以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主。
　　2.W/D比較:與A組比較,C組W/D在2h、6h、12h逐漸增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與C組比較,D組和E組在6h和12h均明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。且E組在6h下降更明顯,與D組相比差異有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.PaO2和PaO2/FiO2的變化:與A組比較,C、D、E三組各時(shí)間點(diǎn)PaO2、PaO2/FiO2明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。D、E組 PaO2、PaO2/FiO2在6h及12h時(shí)間點(diǎn)較C組明顯上升,且以E組6h上升更明顯(P<0.05)。
　　4.免疫組織化學(xué)檢查:光鏡下可見(jiàn)C組大鼠MMP-9主要位于中性粒細(xì)胞,單核巨噬細(xì)胞,淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞胞漿及周?chē)|(zhì)。與同時(shí)間

7、A組比較,C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)MMP-9的表達(dá)明顯升高(P<0.05)。與同時(shí)間C組比較D、E兩組6h、12h下降明顯(P<0.05)。并且E組6hMMP-9下降與D組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.RT-PCR結(jié)果比較:A組和B組MMP-9mRNA呈現(xiàn)弱表達(dá),兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。C組MMP-9mRNA表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。D組和E組MMP-9mRN