姜黃素對大鼠急性肺損傷中MMP-9表達的影響.pdf

1、目的:
　　觀察姜黃素對脂多糖誘導的大鼠急性肺損傷中 MMP-9表達的影響,探討姜黃素治療急性肺損傷的分子生物學機制,為姜黃素的臨床應用提供理論依據。
　　方法:
　　1.采取隨機對照研究,以90只SD雄性大鼠為研究對象,用脂多糖腹腔注射制備急性肺損傷模型。
　　2.實驗分為五組,分別為A組:正常對照組(NS組);B組:溶媒組(DMSO組);C組:模型組(LPS組);D組:姜黃素低劑量處理組(LPS+CMN100

2、mg/kg組);E組:姜黃素高劑量處理組(LPS+CMN200mg/kg組)。每組18只,每組再分為3個時間點亞組:即2h、6h、12h亞組,每個亞組6只(n=6)。
　　3.A組大鼠都給予3ml/kg生理鹽水腹腔注射;B組先注射1ml/kgDMSO后再注入2ml/kg生理鹽水;C組腹腔注射LPS(5mg/kg);D組先注射LPS,30min后腹腔注射100mg/kg CMN;E組先注射LPS,30min后腹腔注射200mg/kg

3、 CMN。以LPS注射時間點為0h,每組取2h、6h、12h共3個觀察時間點,在給藥后相應時間點觀察各組動物的一般情況,然后處死各組動物,取肺組織進行HE染色,抽取腹主動脈血檢測PaO2及PaO2/FiO2,光鏡下觀察肺組織形態(tài)學變化并測定肺濕/干重比評估肺水腫情況,免疫組化和RT-PCR分別測定MMP-9蛋白及mRNA的表達,觀察姜黃素對脂多糖誘導的大鼠急性肺損傷中MMP-9表達的影響。
　　4.統計方法:實驗數據使用SPSS1

4、3.0統計軟件進行統計學處理,計量資料以均數±標準差( x±S)的形式表示,各組之間比較用單因素方差分析(One way ANOVA),方差齊時兩組之間比較采用 S-N-K檢驗,方差不齊者用Games-Howell檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。
　　結果:
　　1.急性肺損傷動物模型制備成功。模型組大鼠一般情況差,被毛松散蓬亂,兩眼無神,活動遲鈍,進食量少,喜扎堆,唇及爪紫紺,并且出現呼吸困難。肺組織大體觀察表現為顏

5、色暗紅,體積增大,表面散在有大小不一的紅色斑點,切面疏松,有淡紅色液體溢出,肺水腫。光鏡下可見肺泡壁毛細血管擴張、充血,氣管及血管周圍有不同程度的水腫,肺內可見小灶狀炎性細胞浸潤,以中性粒細胞浸潤為主。
　　2.W/D比較:與A組比較,C組W/D在2h、6h、12h逐漸增高,差異具有統計學意義(P<0.05)。與C組比較,D組和E組在6h和12h均明顯下降,差異有統計學意義(P<0.05)。且E組在6h下降更明顯,與D組相比差異有

6、統計學意義(P<0.05)。
　　3.PaO2和PaO2/FiO2的變化:與A組比較,C、D、E三組各時間點PaO2、PaO2/FiO2明顯下降,差異有統計學意義(P<0.05)。D、E組 PaO2、PaO2/FiO2在6h及12h時間點較C組明顯上升,且以E組6h上升更明顯(P<0.05)。
　　4.免疫組織化學檢查:光鏡下可見C組大鼠MMP-9主要位于中性粒細胞,單核巨噬細胞,淋巴細胞等炎性細胞胞漿及周圍基質。與同時間

7、A組比較,C組各個時間點MMP-9的表達明顯升高(P<0.05)。與同時間C組比較D、E兩組6h、12h下降明顯(P<0.05)。并且E組6hMMP-9下降與D組比較具有統計學意義(P<0.05)。
　　5.RT-PCR結果比較:A組和B組MMP-9mRNA呈現弱表達,兩組間比較無統計學意義(P>0.05)。C組MMP-9mRNA表達隨時間延長逐漸增高,在各個時間點與A組比較有統計學意義(P<0.05)。D組和E組MMP-9mRN