內(nèi)嗅皮層上的cck的表達(dá)研究及單側(cè)耳蝸摘除后內(nèi)側(cè)膝狀體上Iba-1及GFAP的表達(dá)研究.pdf

1、第一部分:
　　內(nèi)嗅皮層(entorhinal cortex，EC)是大腦中非常重要的記憶器官，在大腦皮層中發(fā)揮著信息傳遞和記憶存儲(chǔ)的功能。在新皮層——EC——海馬的情景記憶環(huán)路中，EC發(fā)揮雙向信息傳遞的作用[1]?？s膽囊素(Cholecystokinin，CCK)是一種廣泛分布在大腦中神經(jīng)肽之一，它可在調(diào)節(jié)內(nèi)在神經(jīng)元興奮性和突觸傳遞功能上發(fā)揮作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)來自內(nèi)嗅皮層的CCK可以增強(qiáng)聽皮層的視聽聯(lián)想記憶，聽皮層上的神經(jīng)可塑

2、性與內(nèi)嗅皮層上的縮膽囊素有關(guān)[3,4]。但是，CCK來自EC的哪一類細(xì)胞以及這類細(xì)胞和聽皮層之間的投射關(guān)系目前尚無明確的證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)擬采用逆行示蹤劑FG,結(jié)合免疫熒光技術(shù)，追蹤這部分CCK能神經(jīng)元的投射路徑，為揭示內(nèi)嗅皮層參與新皮層的學(xué)習(xí)和記憶機(jī)制，提供形態(tài)學(xué)證據(jù)。
　　第二部分:
　　大鼠耳蝸摘除術(shù)是聽覺系統(tǒng)神經(jīng)元可塑性研究中常用的方法之一，通過將單側(cè)或雙側(cè)的耳蝸摘除，使聽覺信號(hào)部分減少或完全消失，可因改變了傳入信息進(jìn)而引

3、起聽覺系統(tǒng)相應(yīng)的可塑性改變。內(nèi)側(cè)膝狀體（medial geniculate body，MGB）是聽覺丘腦上的重要核團(tuán)，可接受下級(jí)核團(tuán)的上傳纖維的投射和大量離皮層下行纖維的投射，因此，MGB在聽覺信息的傳遞和處理過程中具有特殊的功能。成年大鼠單側(cè)傳導(dǎo)性聽力損失0-15 d后，單側(cè)聽力損失隨后的，小膠質(zhì)細(xì)胞在耳蝸核的動(dòng)態(tài)突觸傳遞的調(diào)節(jié)起主要作用[5]。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果顯示，摘除大鼠雙側(cè)耳蝸后，MGB各個(gè)核團(tuán)的神經(jīng)元的興奮性發(fā)生改變，表

4、現(xiàn)出一種超敏或去神經(jīng)超敏狀態(tài)，但膠質(zhì)細(xì)胞是否也在MGB上發(fā)生了相應(yīng)的改變尚不知也未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬采用聽覺去傳入模型，結(jié)合免疫熒光技術(shù)，觀察單側(cè)耳蝸摘除后4h-30d，MGB上小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的變化來研究膠質(zhì)細(xì)胞在聽覺功能可塑性中的作用。
　　目的：
　　（1）觀察CCK來自EC的哪一類細(xì)胞以及這類細(xì)胞和聽皮層之間的投射關(guān)系為揭示內(nèi)嗅皮層參與新皮層的學(xué)習(xí)和記憶機(jī)制，提供形態(tài)學(xué)證據(jù)。
　?。?）觀察單側(cè)耳

5、蝸摘除后4h-30d，MGB上小膠質(zhì)細(xì)胞Iba-1、星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)變化，研究膠質(zhì)細(xì)胞在聽覺功能可塑性中的作用。
　　方法：
　　（1）采用逆行示蹤劑FG,結(jié)合免疫熒光技術(shù)，追蹤來自EC的CCK能神經(jīng)元的投射路徑。
　?。?）采用聽覺去傳入模型，結(jié)合免疫熒光技術(shù)，觀察單側(cè)耳蝸摘除后4h-30d，MGB上小膠質(zhì)細(xì)胞Iba-1、星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的變化。
　　結(jié)果：
　　第一部分：內(nèi)嗅皮層上的CCK

6、的表達(dá)及其神經(jīng)投射
　　大鼠EC上的CCK-8陽性細(xì)胞和VGLUT-1陽性細(xì)胞，都主要分布在EC的L5-6層，在EC的L2-3層也有少量陽性分布。GABA陽性細(xì)胞主要分布在3-6層，在EC的1-2層未見其表達(dá)。用逆向熒光示蹤劑FG標(biāo)記并共染CCK-8、VGLUT-1后，EC的L2-3和L5-6上都能檢測(cè)FG、 CCK-8和VGLUT-1的共表達(dá)，其中L5-6共表達(dá)更密集。
　　第二部分：單側(cè)耳蝸摘除后MGB上Iba-1和GF

7、AP表達(dá)情況
　　耳蝸摘除4h后，小膠質(zhì)細(xì)胞上Iba-1的表達(dá)量達(dá)到最高,其形態(tài)的改變也最明顯，可見胞體增大，突起變細(xì)長且包繞在神經(jīng)元周圍。星型膠質(zhì)細(xì)胞在摘除24h后,MGV上的數(shù)量明顯增多，也可見其胞體增大，突起變細(xì)長并包繞在神經(jīng)元周圍。與正常對(duì)照組相比，耳蝸摘除術(shù)后，雙側(cè)MGB上Iba-1在4h表達(dá)達(dá)到最大化，4h-7d又呈下降趨勢(shì)，而到14d時(shí)又增高，14d-30d又下降，30d時(shí)MGD,MGM基本降至對(duì)照組水平，但在MGV

8、上Iba-1表達(dá)還是高于對(duì)照組；雙側(cè)MGB上GFAP在24h時(shí)表達(dá)達(dá)到最大化，24h-7d又呈下降趨勢(shì)，而到7d-30d時(shí)又小幅度增高，到30d時(shí)雙側(cè)MGB上GFAP的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組。在摘除同側(cè)和對(duì)側(cè)之間比較發(fā)現(xiàn)，雙側(cè)MGB上的Iba-1和GFAP在4h-14d時(shí)，對(duì)側(cè)表達(dá)都是不同程度的高于同側(cè)；而30d時(shí),MGD,MGV兩側(cè)無差異，MGM兩側(cè)有差異。
　　結(jié)論：
　?。?）聽皮層上的CCK主要來源于內(nèi)嗅皮層的第5和第