CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義.pdf

1、宮頸癌（cervicalcancer）是發(fā)生在宮頸鱗狀上皮細胞和宮頸管內膜的柱狀上皮細胞交界處的惡性腫瘤。隨著對女性健康關注的日益增加，宮頸癌被認為是導致女性死亡的第二大惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高，目前僅次于乳腺癌，是女性常見的重大疾病之一。
　　越來越多的報道指出，機體的炎癥感染是導致腫瘤發(fā)生發(fā)展的首要因素。但并不是所有的炎癥都能發(fā)展成為腫瘤。這與機體的免疫調節(jié)以及宮頸的微環(huán)境變化有著密切的關系。有流行病學調查結果指出：人乳頭瘤病

2、毒（humanpapillomavirus,HPV)感染能夠持續(xù)作用于宮頸上皮細胞，并使宮頸上皮細胞適應的宮頸微環(huán)境被破壞，最終能夠導致機體免疫應答平衡失調。另有報道指出：在世界不同地區(qū)，宮頸癌合并高危型HPV感染率為86％-94%，其中以16、18型感染最為常見。越來越多的證據表明，高危型HPV感染與宮頸癌及癌前病變的發(fā)病有著密切的關系。免疫功能是機體識別和排除抗原性異物，維持機體生理平衡的重要機制，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。宮頸癌患

3、者在慢性炎癥的刺激下導致機體的免疫調節(jié)及宮頸微環(huán)境發(fā)生變化。這一系列的變化是如何形成的？機體在面對炎癥刺激如何清除病毒感染？腫瘤細胞在形成的過程中如何逃避機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視？近年來這些問題越來越受到人們的重視。
　　宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤微環(huán)境中局部浸潤淋巴細胞的組成和數量的變化密切相關，大量研究表明腫瘤內或癌灶周圍的淋巴細胞浸潤程度與患者的預后有關。淋巴細胞是機體抵抗腫瘤細胞重要途徑，在腫瘤組織中，淋巴細胞浸潤的數量可以為腫瘤

4、預后的判斷提供依據。腫瘤浸潤性淋巴細胞（tumorinfiltratinglymphocyte,TIL）為一類具有腫瘤浸潤性且具有抗原反應效應的細胞群，它是一種新型的具有腫瘤殺傷作用的效應性T細胞，具有高效性、特異性強、副作用相對較小等特點，由Rosenberg等學者于1986年由荷瘤小鼠腫瘤組織中發(fā)現并成功分離出來。TIL主要包含的是T細胞亞群，同時也包含了B細胞和NK細胞,其表型上主要分為CD4+、CD8+T細胞。CD4+T淋巴細胞

5、主要在機體免疫中起監(jiān)視作用，可以通過識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，找到腫瘤細胞，并誘導其他免疫細胞（常見的有B細胞、具有自然殺傷作用的細胞、巨噬細胞、以及細胞毒T細胞等）并使這些細胞被激活，并且和這些細胞共同發(fā)揮抗腫瘤的作用。另外，CD4+T淋巴細胞還能夠釋放多種的細胞因子，這些細胞因子也能參與機體的抗腫瘤免疫應答。CD8+T細胞也有很多亞型，其中細胞毒性T細胞（cytotoxicTcell，CTL）除了能夠對靶細胞進行清除以外，能對腫

6、瘤細胞及一些被特定病毒感染的細胞進行識別并有殺傷作用。因此，CD8+T細胞的數量決定了其殺傷腫瘤細胞的能力，其數量的多少決定了殺傷靶細胞的整體效率。TIL中CD4+CD25+T細胞是一種對免疫系統(tǒng)起抑制作用的調節(jié)性T細胞(regulatoryTcell，Treg)，而叉狀頭/翅膀狀螺旋轉錄因子（Forkhead/wingedhelixtranscriptionfactor，Foxp3）能夠對Treg細胞的發(fā)育和功能控制起著關鍵的做用。F

7、oxp3+T淋巴細胞能通過基因轉錄水平降低促炎因子的表達，并升高免疫抑制因子的表達，從而達到免疫抑制功能。
　　近年來人們對CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞在腫瘤細胞免疫中的作用給予了很大的關注。研究CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞在宮頸癌微環(huán)境中的浸潤情況對了解宮頸癌局部微環(huán)境的變化及宮頸癌的診治和預后有重要的臨床意義。本研究應用免疫免疫組織化學的方法分別檢測CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織及正常宮頸組

8、織中的表達情況及三者間的關系，進一步探討宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細胞浸潤情況，為臨床治療宮頸癌及評估其預后提供依據。
　　方法：
　　1．臨床病理資料
　　收集2012年7月至2014年7月鄭州大學第一附屬醫(yī)院婦科進行手術切除或活檢的宮頸組織石蠟標本共75例，其中正常宮頸組織12例，宮頸癌63例。宮頸癌組依據2009年國際婦產科聯盟(internationalfederationofgynec

9、ologyandobstetrics，FIGO)的臨床分期標準:宮頸癌I期21例;II期17例;III期20例；IV期5例。
　　2.免疫組織化學
　　蠟塊行4μm厚連續(xù)切片，按常規(guī)方法脫蠟水化并微波修復抗原，采用免疫組化SP法檢測,按試劑說明書進行操作,一抗為鼠單克隆抗體Foxp3（工作濃度為1:100）,兔單克隆抗體CD8（工作濃度為1:500），兔單克隆抗體CD4（工作濃度為1:250），室溫孵育切片過夜，生物素化兔/

10、鼠通用型IgG(1:200)室溫孵育60min；以DAB顯色，蘇木素輕度復染。用PBS液代替第一抗體設為陰性對照，選用已證實為CD4、CD8、Foxp3陽性的切片設為陽性對照。
　　3.統(tǒng)計學處理
　　應用SPSS17.0進行統(tǒng)計學分析。兩個樣本均數的比較采用兩樣t檢驗，多樣本均數的比較采用單因素方差分析；多個樣本率的比較采用（行×列）表χ2檢驗。各檢驗方法均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1

11、.陽性著色為棕黃色顆粒，CD4、CD8位于T淋巴細胞膜或細胞漿，Foxp3陽性染色主要位于T淋巴細胞核內，少數在細胞膜中顯色。CD4在宮頸癌組織中的陽性表達率（46%）明顯低于正常宮頸組織中的陽性表達率（100%），差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CD8在宮頸癌組織中的陽性表達率（36.5%）明顯低于正常宮頸組織中的陽性表達率（100%），差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Foxp3宮頸癌組織中的陽性表達率（77.8%）明顯高于正

12、常宮頸組織中陽性的表達率（8.33%），其差異具有統(tǒng)計學的意義(P<0.05)。
　　2.宮頸癌組織中所含CD4、CD8T細胞的表達均與Foxp3的表達呈負相關（r1=-0.470,r2=-0.538,P均<0.05），CD4和CD8的表達呈正相關（r=-0.538,P<0.05）。
　　3.CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達與患者年齡、病灶大小及HPV感染型別無關(P>0.05)，與FIGO分期、組織學分級相關

13、。與早期（I、II期）宮頸癌組織相比，中晚期（III、IV期）宮頸癌組織中CD4、CD8陽性表達率較低（P均<0.05），Foxp3陽性表達率較高(P<0.05)。與組織分化程度低（G1~G2）的宮頸癌組織相比，組織分化程度較高（G3）的宮頸癌組織中CD4、CD8陽性表達率較高（P均<0.05），Foxp3陽性表達率較低(P<0.05)。
　　結論：
　　1.宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+T淋巴細胞減少或缺失削弱了機體對宮頸