CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、宮頸癌（cervicalcancer）是發(fā)生在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞和宮頸管內(nèi)膜的柱狀上皮細(xì)胞交界處的惡性腫瘤。隨著對(duì)女性健康關(guān)注的日益增加，宮頸癌被認(rèn)為是導(dǎo)致女性死亡的第二大惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高，目前僅次于乳腺癌，是女性常見(jiàn)的重大疾病之一。
　　越來(lái)越多的報(bào)道指出，機(jī)體的炎癥感染是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的首要因素。但并不是所有的炎癥都能發(fā)展成為腫瘤。這與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)以及宮頸的微環(huán)境變化有著密切的關(guān)系。有流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果指出：人乳頭瘤病

2、毒（humanpapillomavirus,HPV)感染能夠持續(xù)作用于宮頸上皮細(xì)胞，并使宮頸上皮細(xì)胞適應(yīng)的宮頸微環(huán)境被破壞，最終能夠?qū)е聶C(jī)體免疫應(yīng)答平衡失調(diào)。另有報(bào)道指出：在世界不同地區(qū)，宮頸癌合并高危型HPV感染率為86％-94%，其中以16、18型感染最為常見(jiàn)。越來(lái)越多的證據(jù)表明，高危型HPV感染與宮頸癌及癌前病變的發(fā)病有著密切的關(guān)系。免疫功能是機(jī)體識(shí)別和排除抗原性異物，維持機(jī)體生理平衡的重要機(jī)制，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。宮頸癌患

3、者在慢性炎癥的刺激下導(dǎo)致機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)及宮頸微環(huán)境發(fā)生變化。這一系列的變化是如何形成的？機(jī)體在面對(duì)炎癥刺激如何清除病毒感染？腫瘤細(xì)胞在形成的過(guò)程中如何逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視？近年來(lái)這些問(wèn)題越來(lái)越受到人們的重視。
　　宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤微環(huán)境中局部浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的組成和數(shù)量的變化密切相關(guān)，大量研究表明腫瘤內(nèi)或癌灶周圍的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度與患者的預(yù)后有關(guān)。淋巴細(xì)胞是機(jī)體抵抗腫瘤細(xì)胞重要途徑，在腫瘤組織中，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量可以為腫瘤

4、預(yù)后的判斷提供依據(jù)。腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞（tumorinfiltratinglymphocyte,TIL）為一類具有腫瘤浸潤(rùn)性且具有抗原反應(yīng)效應(yīng)的細(xì)胞群，它是一種新型的具有腫瘤殺傷作用的效應(yīng)性T細(xì)胞，具有高效性、特異性強(qiáng)、副作用相對(duì)較小等特點(diǎn)，由Rosenberg等學(xué)者于1986年由荷瘤小鼠腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)并成功分離出來(lái)。TIL主要包含的是T細(xì)胞亞群，同時(shí)也包含了B細(xì)胞和NK細(xì)胞,其表型上主要分為CD4+、CD8+T細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞

5、主要在機(jī)體免疫中起監(jiān)視作用，可以通過(guò)識(shí)別腫瘤細(xì)胞分泌的可溶性抗原，找到腫瘤細(xì)胞，并誘導(dǎo)其他免疫細(xì)胞（常見(jiàn)的有B細(xì)胞、具有自然殺傷作用的細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、以及細(xì)胞毒T細(xì)胞等）并使這些細(xì)胞被激活，并且和這些細(xì)胞共同發(fā)揮抗腫瘤的作用。另外，CD4+T淋巴細(xì)胞還能夠釋放多種的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子也能參與機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答。CD8+T細(xì)胞也有很多亞型，其中細(xì)胞毒性T細(xì)胞（cytotoxicTcell，CTL）除了能夠?qū)Π屑?xì)胞進(jìn)行清除以外，能對(duì)腫

6、瘤細(xì)胞及一些被特定病毒感染的細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別并有殺傷作用。因此，CD8+T細(xì)胞的數(shù)量決定了其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，其數(shù)量的多少?zèng)Q定了殺傷靶細(xì)胞的整體效率。TIL中CD4+CD25+T細(xì)胞是一種對(duì)免疫系統(tǒng)起抑制作用的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryTcell，Treg)，而叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子（Forkhead/wingedhelixtranscriptionfactor，F(xiàn)oxp3）能夠?qū)reg細(xì)胞的發(fā)育和功能控制起著關(guān)鍵的做用。F

7、oxp3+T淋巴細(xì)胞能通過(guò)基因轉(zhuǎn)錄水平降低促炎因子的表達(dá)，并升高免疫抑制因子的表達(dá)，從而達(dá)到免疫抑制功能。
　　近年來(lái)人們對(duì)CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞免疫中的作用給予了很大的關(guān)注。研究CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細(xì)胞在宮頸癌微環(huán)境中的浸潤(rùn)情況對(duì)了解宮頸癌局部微環(huán)境的變化及宮頸癌的診治和預(yù)后有重要的臨床意義。本研究應(yīng)用免疫免疫組織化學(xué)的方法分別檢測(cè)CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織及正常宮頸組

8、織中的表達(dá)情況及三者間的關(guān)系，進(jìn)一步探討宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+及Foxp3+T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況，為臨床治療宮頸癌及評(píng)估其預(yù)后提供依據(jù)。
　　方法：
　　1．臨床病理資料
　　收集2012年7月至2014年7月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科進(jìn)行手術(shù)切除或活檢的宮頸組織石蠟標(biāo)本共75例，其中正常宮頸組織12例，宮頸癌63例。宮頸癌組依據(jù)2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(internationalfederationofgynec

9、ologyandobstetrics，F(xiàn)IGO)的臨床分期標(biāo)準(zhǔn):宮頸癌I期21例;II期17例;III期20例；IV期5例。
　　2.免疫組織化學(xué)
　　蠟塊行4μm厚連續(xù)切片，按常規(guī)方法脫蠟水化并微波修復(fù)抗原，采用免疫組化SP法檢測(cè),按試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作,一抗為鼠單克隆抗體Foxp3（工作濃度為1:100）,兔單克隆抗體CD8（工作濃度為1:500），兔單克隆抗體CD4（工作濃度為1:250），室溫孵育切片過(guò)夜，生物素化兔/

10、鼠通用型IgG(1:200)室溫孵育60min；以DAB顯色，蘇木素輕度復(fù)染。用PBS液代替第一抗體設(shè)為陰性對(duì)照，選用已證實(shí)為CD4、CD8、Foxp3陽(yáng)性的切片設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　應(yīng)用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩個(gè)樣本均數(shù)的比較采用兩樣t檢驗(yàn)，多樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析；多個(gè)樣本率的比較采用（行×列）表χ2檢驗(yàn)。各檢驗(yàn)方法均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1

11、.陽(yáng)性著色為棕黃色顆粒，CD4、CD8位于T淋巴細(xì)胞膜或細(xì)胞漿，F(xiàn)oxp3陽(yáng)性染色主要位于T淋巴細(xì)胞核內(nèi)，少數(shù)在細(xì)胞膜中顯色。CD4在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（46%）明顯低于正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（100%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CD8在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（36.5%）明顯低于正常宮頸組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（100%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Foxp3宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（77.8%）明顯高于正

12、常宮頸組織中陽(yáng)性的表達(dá)率（8.33%），其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P<0.05)。
　　2.宮頸癌組織中所含CD4、CD8T細(xì)胞的表達(dá)均與Foxp3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r1=-0.470,r2=-0.538,P均<0.05），CD4和CD8的表達(dá)呈正相關(guān)（r=-0.538,P<0.05）。
　　3.CD4、CD8及Foxp3在宮頸癌組織中的表達(dá)與患者年齡、病灶大小及HPV感染型別無(wú)關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)相關(guān)

13、。與早期（I、II期）宮頸癌組織相比，中晚期（III、IV期）宮頸癌組織中CD4、CD8陽(yáng)性表達(dá)率較低（P均<0.05），F(xiàn)oxp3陽(yáng)性表達(dá)率較高(P<0.05)。與組織分化程度低（G1~G2）的宮頸癌組織相比，組織分化程度較高（G3）的宮頸癌組織中CD4、CD8陽(yáng)性表達(dá)率較高（P均<0.05），F(xiàn)oxp3陽(yáng)性表達(dá)率較低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.宮頸微環(huán)境中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞減少或缺失削弱了機(jī)體對(duì)宮頸