CD4~+CD25~+Foxp3~+調節(jié)性T細胞在肺癌中表達的研究.pdf

1、背景和目的：
　　機體的免疫系統是一個復雜的網絡調控體系,由固有免疫和適應性免疫組成,能夠聚集一系列細胞和分子阻止病原微生物的進入和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。理論上講,腫瘤細胞可以被抗原提呈細胞包括樹突狀細胞和巨噬細胞、免疫效應細胞包括NK細胞以及細胞毒性T細胞(CTL)等識別、攻擊和清除。
　　此外,腫瘤患者和荷瘤小鼠的體內都能檢測到一定的抗腫瘤免疫反應。那么,為什么腫瘤會發(fā)生發(fā)展?而且絕大部分荷瘤宿主最終死于腫瘤呢?顯然,腫瘤細胞

2、能夠逃脫宿主的免疫攻擊。
　　目前人們發(fā)現了很多機制來解釋腫瘤的免疫逃逸和免疫抑制,其中,腫瘤誘導產生的具有負向調控機體免疫反應的抑制性細胞(如調節(jié)性T細胞,Treg等)近年來被廣為研究。1995年,Sakaguchi等首先發(fā)現將去除了CD4~+CD25~+組分的T細胞轉移到裸鼠體內會引發(fā)多種自身免疫性疾病,而當同時輸入CD4~+CD25~+T細胞則可抑制疾病的發(fā)生。
　　在隨后體外的研究中也發(fā)現CD4~+CD25~+T細胞

3、具有低反應性和免疫抑制功能,自此有關CD4~+CD25~+調節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Treg)的研究得到迅猛發(fā)展。Treg具有免疫抑制效應,在免疫病理、移植物耐受、抑制自身免疫反應和維持機體免疫平衡中都起著重要作用。
　　機體內天然產生的CD4~+CD25~+Treg來源于胸腺,其表面標志主要有CD25、細胞毒性T淋巴細胞抗原4(CTLA-4)、IL-2受體β鏈(CD122)和糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子

4、受體(glucocorticoid-induced TNFreceptor,GITR)。同時,CD4~+CD25~+Treg胞內高表達Foxp3(轉錄因子forkhead/winged helix家族),這是其特征性的標志。除此之外CD4~+CD25~+Treg還高表達一些趨化因子受體,而色氨酸分解酶(IDO)、TGF-β和CD80則是其活化的標志。
　　目前認為該群體可分為“天然的”和“誘導的”兩類。對于“誘導的”CD4~+CD

5、25~+Treg細胞,因為其難以分離進行研究,與“天然的”CD4~+CD25~+Treg的細胞的關系沒有完全明了?？赡芤灿捎凇罢T導的”CD4~+CD25~+Treg細胞的存在,給CD4~+CD25~+Treg產生機制的研究帶來了困難。
　　對于“天然的”CD4~+CD25~+Treg細胞,有些學者認為該群體可能是由胸腺產生的一個獨立群體。而對這一觀點具有挑戰(zhàn)性的假說是:這一群體可能是在外周產生,只是在抗原刺激后而轉運回到胸腺髓質中

6、的。國外實驗證明,新生兒出生后兩天時,胸腺內已含有具有CD4~+CD25~+Treg細胞樣表型和功能的細胞,而此時在脾中尚不能探查到任何種類的T細胞。早期的研究也表明,在新生兒出生3天之前,在外周有極少的CD4~+CD25~+Treg細胞。然而又有文獻報道,新生鼠出生3天時進行胸腺切除術后,CD4~+CD25~+Treg細胞和外周T細胞有所減少,但已具有顯著數量的表達FOXP3的CD4~+CD25~+Treg細胞群。
　　綜合以上

7、結果,我們認為:至少部分“天然的”CD4~+CD25~+Treg細胞產生于胸腺。早期報道,CD4~+CD25~+Treg細胞呈現免疫無能性。但是近來,包括Earle等在內的幾個不同的研究組,分別在不同的條件下使該細胞增殖。
　　Earle等從人體外周血分離的CD4~+CD25~+Treg細胞,在體外用抗CD3和抗CD28抗體共價相連的超順磁性珠和高濃度外源IL-2刺激下可以擴增200倍。而且,擴增后的細胞仍然高表達CD25、CD6

8、2L、HLA-DR、CCR6和FOXP3等Treg細胞的標志分子,在抗-CD3或者同種抗原刺激下可抑制效應性PBMCs的增殖和細胞因子的分泌?？梢奀D4~+CD25~+Treg細胞并非免疫無能,只是它的增殖條件與傳統的T細胞不同。
　　CD4~+CD25~+Treg細胞在免疫調節(jié)中的功能已經得到了肯定,已經有大量實驗證明,該細胞在對自身和異己的免疫耐受中都起到重要作用。CD4~+CD25~+Treg有2個明顯的免疫學特性。

9、　　一是免疫無能性,即對高濃度白細胞介素2(IL-2)單獨刺激或經T細胞受體(T cell receptor,TCR)刺激無反應,也不分泌IL-2;但體內實驗發(fā)現,抗原特異性Treg具有顯著的增殖活性,而且高度依賴于特異性抗原的存在。
　　二是免疫抑制性,表現在經TCR介導的信號刺激活化以后能夠抑制自身T細胞的活化和增殖,但其在體內發(fā)揮免疫調節(jié)功能、維持自身免疫耐受的詳細機制目前尚不清楚。Sakaguchi等認為其作用機制可能是通

10、過細胞直接接觸的方式發(fā)揮作用,或通過分泌調節(jié)性細胞因子如白細胞介素10(IL-10)、TGF-β及通過抑制樹突狀細胞成熟等方式發(fā)揮作用。
　　有報道認為FoxP3在幼稚CD4T細胞的過表達是CD4~+CD25~+Treg低反應性和抑制作用的主要原因。多項研究發(fā)現,在胃癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、鼻咽癌等不同惡性腫瘤患者的外周血、淋巴結及腫瘤浸潤區(qū)域組織中,均存在CD4~+CD25~+Treg比例增高的現象,并且其增高水平與病

11、程進展和臨床病理存在顯著相關性。目前尚缺乏明確證據證明腫瘤機體CD4~+CD25~+Treg增多的機制。
　　但推測有以下幾種可能性:
　?、倌[瘤分泌的某些因子直接或間接地吸引、誘導CD4~+CD25~+Treg的特定擴增。Curiel等研究發(fā)現,卵巢癌患者的腫瘤細胞分泌趨化因子CCL22,招募CD4~+CD25~+Treg至腫瘤部位,因而出現CD4~+CD25~+Treg在癌腫組織中聚集的現象,而在正常的卵巢組織中幾乎不能

12、看到CD4~+CD25~+Treg。
　?、诳乖岢始毎岢实哪[瘤相關抗原誘導Treg的擴增。
　?、蹤C體對由腫瘤誘導的持續(xù)炎癥刺激所形成的一種生理防御現象。
　?、茉卺槍μ禺愋钥乖目寺h除或由Fas-FasL介導的凋亡中,CD4~+CD25~+Treg和CD4~+CD25~-Treg在敏感性上存在差異,腫瘤分泌的因子可能會選擇性地誘導CD4~+CD25~-Treg凋亡。目前尚沒有關于CD4~+CD25~+Foxp3

13、~+Treg細胞在肺癌外周血、肺癌組織及癌旁組織中表達的情況及其增多的機制。我們的試驗是觀察CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg細胞在肺癌患者體內異常聚集情況,進一步探討其機制和在肺癌患者體內調節(jié)免疫抑制作用。
　　方法:
　　采用流式細胞術對45例肺癌患者的癌組織,相應的癌旁組織、外周血及15例正常志愿者外周血以及來我院治療的16例Ⅲ、Ⅳ期患者外周血中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg調節(jié)性T細胞檢測,

14、并結合臨床資料進行相關性分析。運用熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài)。采用SPSS13.0統計軟件對數據進行單因素的方差分析,并對各組之間進行兩兩比較。
　　結果:
　　肺癌患者癌組織中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg調節(jié)性T細胞在CD4~+T細胞中所占比例是10.54±1.12％;45例外周血中和癌旁組織表達陽性分別是8.24±2.16％和3.62±1.24％,癌組織明顯高于外周血和癌旁組織(p<0.05)。肺癌患者外周血

15、中Treg細胞(9.28±2.10％)明顯高于志愿者(2.63±1.28％)。結合臨床資料分析顯示CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg調節(jié)性T細胞在肺腺癌中表達(11.26±3.12％)高于鱗癌(8.34±2.90％),并且與腫瘤的臨床分期具有一定相關性。Ⅲ、Ⅳ期患者外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg調節(jié)性T細胞表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期患者,P<0.05,差異具有統計學意義。
　　結論:
　　CD4~+