BKCa在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：
　　 宮頸癌是發(fā)展中國(guó)家婦女最常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)病率占女性生殖器官惡性腫瘤的首位。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道:一些類(lèi)型鉀離子通道在宮頸癌中大量表達(dá),并與宮頸癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,對(duì)鉀離子通道的研究已引起臨床的高度重視。鉀離子通道是鑲嵌在細(xì)胞膜脂質(zhì)中的蛋白復(fù)合體,應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白如cyclinD,細(xì)胞信號(hào)通道及DNA合成等都證明鉀通道阻斷劑能夠抑制細(xì)胞周期G1期的進(jìn)展[1-3]。鈣

2、離子激活鉀離子通道,目前已知存在3種不同的亞單位:高電導(dǎo)鈣離子激活鉀離子通道(BKCa)、中電導(dǎo)鈣離子激活鉀離子通道(IKCa)、低電導(dǎo)鈣離子激活鉀離子通道(SKCa)。有研究報(bào)道鈣離子激活鉀離子通道在多種腫瘤細(xì)胞中有表達(dá),如前列腺癌[4]、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、胃癌、胰腺癌、垂體瘤、乳腺癌、直腸癌和結(jié)腸癌[5]。在宮頸癌細(xì)胞系中有表達(dá),而其在宮頸癌活體組織中的表達(dá)情況如何,與細(xì)胞增殖、分化和預(yù)后有何關(guān)系尚不清楚。因此,本研究選取BKCa檢測(cè)

3、其在正常宮頸組織和宮頸癌及宮頸癌放化療前后組織中的表達(dá)情況,探討B(tài)KCa基因表達(dá)與宮頸癌發(fā)生,發(fā)展的關(guān)系及放絲療對(duì)其影響。
　　 材料與方法
　　 一、實(shí)驗(yàn)材料
　　 1、標(biāo)本
　　 取自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科2006年至2009年間病理證實(shí)為宮頸癌標(biāo)本30例,正常宮頸組織標(biāo)本10例,同一宮頸癌患者治療前及放化療兩周時(shí)標(biāo)本10對(duì),將這些新鮮組織貯存于一80攝氏度冰箱中保存,以供日后提取RNA所用。宮

4、頸癌患者的臨床資料包括(1)年齡,(2)臨床分期(FIGO),(3)組織學(xué)分類(lèi)。
　　 2、試劑
　　 RNAiso Reagent(Total RNA提取試劑),TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver3.0(寶生物工程(大連)有限公司),BKCa及β-actin上2游及下游特異性引物由日本TaKaRa公司合成。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 RT-PCR技術(shù)
　　 三、結(jié)果判定

5、　　 BKCamRNA通過(guò)PCR儀擴(kuò)增后,行瓊脂糖凝膠電泳,紫外燈下觀察結(jié)果,并通過(guò)測(cè)量灰度值對(duì)其進(jìn)行半定量分析。
　　 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 所有數(shù)據(jù)資料用SPSS13.0進(jìn)行處理,各組計(jì)量資料的結(jié)果采用f檢驗(yàn),P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié) 果
　　 1、正常宮頸組織和宮頸癌中BKCa mRNA的表達(dá)
　　 BKCa mRNA在正常宮頸組織中的表達(dá)的灰度值的比值為0.6720,與宮頸癌

6、組織中的1.2464相比,有顯著性差異(P=0.001)
　　 2、宮頸癌的各種臨床病理因素間的BKCa mRNA的關(guān)系
　　 BKCa mRNA在G1期中表達(dá)為0.9943、G2期為1.1360,與G3期的1.5788相比有顯著性差異(P=0.002),BKCa mRNA在宮頸癌Ⅰ-Ⅱ期中表達(dá)為1.0842,在Ⅲ-Ⅳ期中表達(dá)為3.5688,兩者有顯著性差異(P=0.001)。在年齡≥50歲組BKCamRNA的表達(dá)為1.

7、2207與年齡<50歲組的1.2918比較,二者之間無(wú)顯著性差異(P=0.658)
　　 3、放化療前及放化療兩周時(shí)BKCa mRNA的表達(dá)
　　 BKCa mRNA在放化療前的宮頸癌組織中表達(dá)為1.1359,放化療兩周時(shí)BKCamRNA表達(dá)為0.5730相比,二者相比有顯著性差異(P<0.001)
　　 結(jié) 論
　　 1、BKCa基因參與宮頸癌惡性增殖過(guò)程,提示BKCa通道與宮頸癌細(xì)胞增值有關(guān)。