臨床分離變形菌族中整合子分布及質粒介導的喹諾酮耐藥機制研究.pdf

1、目的：
　　分析溫州醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床分離的變形菌族細菌的耐藥特性，研究變形菌族細菌中整合子與質粒介導的喹諾酮耐藥基因(plasmid-mediatedquinolone resistance determinants，PMQRs)的流行分布特征，為有效防治細菌耐藥性的產(chǎn)生和播散提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.回顧性調查2011年1月至2013年12月期間分離自溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床患者標本的176株非

2、重復變形菌族細菌的臨床分布特征，分析其耐藥狀況。
　　2.整合子及其可變區(qū)攜帶基因盒的篩查:采用PCR方法檢測176株變形菌族細菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類整合子的攜帶情況，限制性片段長度多態(tài)性方法檢測整合子可變區(qū)基因盒，將整合子陽性菌株可變區(qū)基因序列采用AluⅠ/HaeⅢ限制性內(nèi)切酶進行酶切后電泳，挑選陽性PCR產(chǎn)物測序確定可變區(qū)耐藥基因盒攜帶情況。
　　3.PMQRs基因的篩查:通過PCR方法擴增所有實驗菌株中的PMQRs基因，包括q

3、nrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD、aac(6')-Ib-cr、 qepA以及oqxAB基因。
　　結果：
　　1.2011年～2013年間從溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院臨床患者分離中的變形菌族細菌共176株，其中包括摩根摩根菌97株，奇異變形桿菌66株，普通變形桿菌10株，雷氏普羅威登斯菌3株。176株變形菌株的標本來源以尿液為主(33.0％)，其次是痰液(25.0％)，膿液(13.6％)，分泌物(10.8％)，引

4、流液(9.7％)，其他類型的標本(7.9％)。臨床抗菌藥物敏感性試驗結果顯示:176株變形菌株中120株為多重耐藥變形菌族細菌，其多重耐藥率為68.2％。臨床分離菌株對復方新諾明耐藥性最高，耐藥率為45.5％;而對哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星及頭孢哌酮/他唑巴坦的耐藥率較低，分別為1.1％、1.7％和2.3％。
　　2.PCR檢測發(fā)現(xiàn)176株變形菌株中Ⅰ類整合子有82株，占46.5％，Ⅱ類整合子19株，占10.8％，并未檢出Ⅲ類整

5、合子。整合子陽性菌株對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、慶大霉素、妥布霉素以及復方新諾明5種抗菌藥物的耐藥率分別為29.7％、23.8％、40.6％、12.9％和54.5％，均明顯高于整合子陰性菌株(P＜0.05);在120株MDR菌株中，65.0％為整合子陽性菌株，在56株非MDR菌株中，23.2％為整合子陽性菌株，統(tǒng)計分析表明MDR菌株整合子攜帶率高于非MDR菌株(P＜0.05);Ⅰ類整合子可變區(qū)共檢出15種耐藥基因盒，包括aadB-catB3

6、（5株）、dfrA12-aadA5（18株）、dfrA12-orfF-aadA2（4株）、dfrA17-aadA5（5株）、cmlA1-aac(6')-Ib-aacA4(10株)、dfrA17(7株)、aadB-qacEdelta1(3株)、aadB-cat-blaoXA10-aadA1(5株)、dfrA1-orfC（1株）、aadA1（1株）、aadA2（1株）、blaPSE-1（2株）、aadB-aadA2（3株）、aadB-cat

7、-blaOXA10-aadA1-dfrA1-aacA4（1株）和dfrA15（1株），其中dfrA12-aadA5檢出率最高;Ⅱ類整合子可變區(qū)共檢出sat2-aadA1（1株）和dfrA12-sat2-aadA1（5株）dfrA1-catB2-sat2-aadA1（1株）3種基因盒。
　　3.PCR檢測結果顯示176株變形菌株中共40株攜帶qnrD基因，包括17株摩根摩根菌，20株奇異變形桿菌，2株普通變形桿菌及1株普羅威登菌菌;

8、5株摩根摩根菌和3株奇異變形桿菌攜帶aac(6')-Ib-cr基因;1株奇異變形桿菌與1株普通變形桿菌攜帶qnrB基因;3株摩根摩根攜帶qepA基因;2株摩根摩根菌、2株奇異變形桿菌和1株普通變形桿菌oqxAB基因陽性。所有菌株中均未檢出qnrA、qnrC和qnrS基因。
　　結論：
　　1.臨床分離的變形菌族細菌耐藥性較嚴重，多重耐藥菌株分離率達68.2％。MDR菌株的整合子攜帶率明顯高于非MDR菌株菌株，整合子與變形菌多

9、重耐藥的產(chǎn)生有一定的相關性。
　　2.變形菌族中Ⅰ、Ⅱ類整合子攜帶率較高，并且相比整合子陰性變形菌，整合子陽性菌株對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、慶大霉素、妥布霉素以及復方新諾明抗菌藥物耐藥率顯著升高。此外，摩根摩根菌中3種基因盒序列dfrA1-sat2-aadA1、dfrA1-catB2-sat2-aadA1及sat2-aadA1為國內(nèi)首次報道。
　　3.我院分離的變形菌族細菌中qnrD基因的存在非常普遍。然而，qnr基因與整合子