輔酶NAD(P)H自發(fā)熒光在細(xì)胞內(nèi)的觀測(cè).pdf

1、新陳代謝是生命活動(dòng)的基礎(chǔ),是生命活動(dòng)最重要的特征。研究活細(xì)胞中新陳代謝的情況對(duì)分析細(xì)胞活性和生命活動(dòng)有重要意義,NAD(P)H自發(fā)熒光是表征細(xì)胞內(nèi)新陳代謝的一個(gè)指標(biāo),可以通過熒光顯微鏡來(lái)探測(cè)細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H分布和變化情況?；跓晒獬上窈凸庾V技術(shù)的,觀測(cè)活細(xì)胞和活組織內(nèi)的生物熒光現(xiàn)象,是現(xiàn)今光生物學(xué)研究領(lǐng)域的重要課題。熒光顯微鏡在生命科學(xué)領(lǐng)域的廣泛運(yùn)用,為探索生物提供了有利地手段。運(yùn)用奧林巴斯IX2-DSU——轉(zhuǎn)盤式共聚焦顯微鏡(Di

2、sk Scanning Biological Microscope)可以滿足實(shí)驗(yàn)中的總體需求。為了保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行,分辨率、靈敏度、成像速度、光漂白等因素都應(yīng)經(jīng)過慎重選擇和考慮。近年來(lái)也有研究表明在嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞中,可以觀測(cè)到周期性振蕩的存在。從物理學(xué)角度考慮,時(shí)空的結(jié)構(gòu)存在于許多物理、化學(xué)、生物的狀態(tài)之中。當(dāng)一個(gè)化學(xué)系統(tǒng)遠(yuǎn)離平衡態(tài)時(shí),這個(gè)系統(tǒng)就會(huì)不穩(wěn)定,并且自發(fā)地形成一些時(shí)間和空間結(jié)構(gòu),即耗散結(jié)構(gòu)。這種表征新陳

3、代謝的耗散結(jié)構(gòu)存在一定的普遍性,細(xì)胞系(株)之間存在的差別和具體作用機(jī)理都是這方面研究的關(guān)注點(diǎn)。
　　 本文在前人對(duì)嗜中性粒細(xì)胞的NAD(P)H自發(fā)熒光的研究基礎(chǔ)上,我們發(fā)現(xiàn)在RBL-2H3細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中也能觀察到NAD(P)H波的存在,這一點(diǎn)也證實(shí):這樣的新陳代謝結(jié)構(gòu)在細(xì)胞中是普遍存在的。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)NAD(P)H波的存在和移動(dòng)與NAD(P)H的分布有密切聯(lián)系。當(dāng)NAD(P)H主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,NAD(P)H就有了形成的

4、基礎(chǔ)。當(dāng)在另外一些細(xì)胞中NAD(P)H主要被局限于線粒體中時(shí),表征細(xì)胞新陳代謝的NAD(P)H振蕩此時(shí)將由細(xì)胞質(zhì)中的存在轉(zhuǎn)換成在線粒體中存在。外界物理因素對(duì)生物體的新陳代謝有重要影響。溫度往往是考量生物體對(duì)外界敏感度的一個(gè)參數(shù)。我們研究發(fā)現(xiàn):RBL-2H3細(xì)胞的NAD(P)H自發(fā)熒光在不同溫度下的熒光強(qiáng)度會(huì)有一定變化。隨著溫度的升高,處在分裂期的細(xì)胞NAD(P)H熒光強(qiáng)度有大幅度的降低;而處在分裂間期的細(xì)胞的NAD(P)H熒光強(qiáng)度沒有明