磁標(biāo)記兔脂肪干細(xì)胞與建立兔腰椎間盤退變模型及MR定量的研究.pdf

1、第一部分兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及體外磁標(biāo)記MR成像
　　目的:研究兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)的培養(yǎng)鑒定方法，聯(lián)合應(yīng)用超順磁性氧化鐵(SPIO)和多聚賴氨酸(PLL)行體外磁標(biāo)記細(xì)胞，并探討磁標(biāo)記示蹤的可行性。
　　方法:分離、純化并培養(yǎng)兔ADSCs，流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面抗原CD90、CD44和CD34。應(yīng)用SPIO-PLL標(biāo)記細(xì)胞，普魯士藍(lán)染色和透射電鏡檢測胞內(nèi)鐵粒子。體外3.0T MR分別對(duì)1×107個(gè)未標(biāo)記

2、細(xì)胞，經(jīng)25、50、75μ g/ml SPIO-PLL標(biāo)記的1×107個(gè)細(xì)胞;1×107個(gè)ADSCs(標(biāo)記1d)、1×107個(gè)（標(biāo)記3d）和5×106個(gè)（標(biāo)記1d）進(jìn)行成像，包括T1WI、T2WI及T2*WI序列，并測量各組的信號(hào)強(qiáng)度和弛豫時(shí)間。
　　結(jié)果:第3代ADSCs純度高、排列規(guī)則、細(xì)胞呈漩渦狀，流式結(jié)果示CD44和CD90陽性表達(dá)率分別為99.2％、98.7％，CD34表達(dá)陰性。普魯士藍(lán)染色和透射電鏡示胞漿內(nèi)藍(lán)色顆粒，磁

3、標(biāo)記率近100％。MR示隨著SPIO-PLL的濃度增高，T2*WI和T2WI序列的信號(hào)強(qiáng)度變化較T1WI明顯。1×107個(gè)ADSCs(標(biāo)記1d)的信號(hào)強(qiáng)度變化率較1×107個(gè)（標(biāo)記3d）和5×106個(gè)（標(biāo)記1d）大，T2*和T2弛豫時(shí)間與T1弛豫時(shí)間相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=161.47，P＜0.05)，但T2*和T2弛豫時(shí)間相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.88，P＞0.05)。
　　結(jié)論:通過分離純化培養(yǎng)可獲得足量的ADSCs，SP

4、IO-PLL能夠有效標(biāo)記ADSCs，體外可行MR細(xì)胞成像，以T2*WI和T2WI序列敏感。
　　第二部分髓核針刺抽吸法建立兔腰椎間盤退變模型及MR定量研究
　　目的:建立兔腰椎間盤退變模型并提高其退變機(jī)制的認(rèn)識(shí)。
　　方法:18只新西蘭大白兔，側(cè)后方入路手術(shù)暴露腰椎間盤，18G穿刺針抽吸12只L2/3、L3/4、L4/5髓核，各約5mg，正常L1/2、L5/6和另6只L2-5間椎間盤分別為組內(nèi)和組間對(duì)照。術(shù)后第4、8、

5、12周行MR矢狀位T2WI和T2-mapping序列檢查，取正中矢狀面觀察各椎間盤的信號(hào)并測量T2弛豫時(shí)間并與正常組比較。相應(yīng)各時(shí)間點(diǎn)取2只L1-6間椎間盤行HE和Masson染色，觀察纖維環(huán)形態(tài)、髓核細(xì)胞及基質(zhì)的變化并與正常組比較。
　　結(jié)果:椎間盤為一豆點(diǎn)大隆起，18G穿刺針經(jīng)脊柱旁路于橫突根部可成功穿刺抽吸髓核。正常椎間盤T2WI序列為均勻高信號(hào)，實(shí)驗(yàn)組隨時(shí)間延長信號(hào)逐漸降低，第8周明顯降低，第12周基本完全呈低信號(hào);第8周