Caveolin-1與慢性非細菌性膀胱炎發(fā)病機制關系的初步研究.pdf

1、目的：
　　 非細菌性膀胱炎(nonbacteriAlcystitis，NBC)是指原因不明的一組慢性膀胱壁炎癥性疾病，其臨床表現為尿頻、尿急、尿痛及膀胱區(qū)疼痛等，尿培養(yǎng)陰性。非細菌性膀胱炎多見于女性，臨床發(fā)病率高，治療效果差，部分患者遷延不愈，甚至最終發(fā)展為間質性膀胱炎，嚴重影響患者生活質量，究其原因主要是病因不明，發(fā)病機制不清。
　　 關于NBC 發(fā)病機制的說法不一，目前主導學說是膀胱粘膜上皮屏障理論。多數學者研究認

2、為膀胱粘膜面GAGs(葡萄糖胺聚糖)是構成膀胱上皮通透性屏障的最主要成分，GAGs的缺失是導致慢性非細菌性膀胱炎發(fā)病的主要原因。文獻報道，補充外源性GAGs 有一定療效，但停藥后多數患者均會復發(fā)，無法達到長期或徹底治愈，我們認為可能存在其它尚未認知的發(fā)病因素。因此，深入探討慢性非細菌性膀胱炎的發(fā)病機制對該病的臨床診治有一定的指導意義。
　　 Caveolin-1是近年來研究發(fā)現的表達于上皮細胞的膜表面標記性結構蛋白，它主要介導毒

3、素、尿素、銨、電解質及化學因子等物質內化入胞，并通過與不同信號分子結合參與調節(jié)炎癥反應的發(fā)生發(fā)展。研究證實，Caveolin-1參與了慢性肺炎、慢性纖維肌炎及炎癥性腸病等疾病的病理過程。然而關于Caveolin-1在非細菌性膀胱炎膀胱粘膜上皮組織中的表達及其與該病關系的研究尚未見文獻報道。本研究初步探討Caveolin-1在慢性非細菌性膀胱炎中的表達及其在發(fā)病機制中可能發(fā)揮的作用，為深入研究Caveolin-1與NBC 發(fā)病的關系打下理

4、論基礎，為NBC的臨床治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 1、建立慢性非細菌性膀胱炎患者入選標準，確定納入該項研究的患者，征得患者同意并簽署知情同意書；膀胱鏡下收集NBC患者的膀胱活檢組織及尿液標本。
　　 2、采用熒光免疫組化染色和Westen blot等檢測膀胱活檢組織中Caveolin-1的表達情況，ELISA 檢測尿液中炎癥因子TNF-α、IL-6水平。
　　 3、小鼠Caveolin-1基因

5、的克隆及載體構建：PCR 法擴增 Cav-1cDNA 全長基因序列，將其克隆至慢病毒表達載體pRNAi-u2.6上并進行慢病毒包裝。經尾靜脈注射慢病毒載體pRNAi-u2.6-Cav-1轉染c57BL/6小鼠，3周后利用熒光顯微鏡及免疫組化法鑒定轉染情況。
　　 4、環(huán)磷酰胺腹腔注射c57BL/6小鼠(75mg/kg，每三天注射一次，共三次)誘導構建慢性非細菌性膀胱炎動物模型。
　　 5、動物實驗分組：生理鹽水組小鼠作為

6、實驗對照設置為A組，pRNAi-u2.6-Cav-1慢病毒轉染成功后注射環(huán)磷酰胺的小鼠設置為B組，另設C組為單純環(huán)磷酰胺注射組小鼠。觀察各組小鼠排尿情況及組織病理學改變，并檢測相關炎癥指標。
　　 主要結果：
　　 1、19例NBC患者入選該項實驗研究并成功收集樣本。利用熒光免疫染色和Westenblot方法成功檢測到13例NBC患者(68.4％)膀胱粘膜上皮表達Caveolin-1，7例正常對照組中僅有1例呈弱陽性表達

7、(14.3％)。推測Caveolin-1的表達與NBC的發(fā)病可能存在密切的相關性。
　　 2、成功構建Caveolin-1轉基因小鼠模型及慢性非細菌性膀胱炎小鼠模型。
　　 3、Caveolin-1轉染后的c57BL/6小鼠在環(huán)磷酰胺誘導下的膀胱炎模型與未轉染組相比較，從大體標本看膀胱體積增大、肥厚，充血、水腫更明顯，膀胱濕重顯著增加；
　　 組織切片HE 染色觀察，前者粘膜層及粘膜下層明顯增厚，炎癥細胞浸潤更多

8、，粘膜連續(xù)性破壞也更明顯；組織炎癥因子(TNF-α，IL-6)的表達水平顯著增高。動物實驗證實Caveolin-1極可能參與非細菌性膀胱炎的發(fā)病過程并且促進炎癥反應的發(fā)生。
　　 結論：
　　 本研究從臨床篩選患者到動物實驗兩部分驗證Caveolin-1的表達與NBC的關系，結果高度提示Caveolin-1極可能參與NBC的發(fā)病過程并發(fā)揮重要作用，這為深入研究Caveolin-1在NBC 發(fā)病中的具體機制或信號通路等提供