Caveolin-1與慢性非細(xì)菌性膀胱炎發(fā)病機(jī)制關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的：
　　 非細(xì)菌性膀胱炎(nonbacteriAlcystitis，NBC)是指原因不明的一組慢性膀胱壁炎癥性疾病，其臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛及膀胱區(qū)疼痛等，尿培養(yǎng)陰性。非細(xì)菌性膀胱炎多見于女性，臨床發(fā)病率高，治療效果差，部分患者遷延不愈，甚至最終發(fā)展為間質(zhì)性膀胱炎，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，究其原因主要是病因不明，發(fā)病機(jī)制不清。
　　 關(guān)于NBC 發(fā)病機(jī)制的說法不一，目前主導(dǎo)學(xué)說是膀胱粘膜上皮屏障理論。多數(shù)學(xué)者研究認(rèn)

2、為膀胱粘膜面GAGs(葡萄糖胺聚糖)是構(gòu)成膀胱上皮通透性屏障的最主要成分，GAGs的缺失是導(dǎo)致慢性非細(xì)菌性膀胱炎發(fā)病的主要原因。文獻(xiàn)報(bào)道，補(bǔ)充外源性GAGs 有一定療效，但停藥后多數(shù)患者均會復(fù)發(fā)，無法達(dá)到長期或徹底治愈，我們認(rèn)為可能存在其它尚未認(rèn)知的發(fā)病因素。因此，深入探討慢性非細(xì)菌性膀胱炎的發(fā)病機(jī)制對該病的臨床診治有一定的指導(dǎo)意義。
　　 Caveolin-1是近年來研究發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于上皮細(xì)胞的膜表面標(biāo)記性結(jié)構(gòu)蛋白，它主要介導(dǎo)毒

3、素、尿素、銨、電解質(zhì)及化學(xué)因子等物質(zhì)內(nèi)化入胞，并通過與不同信號分子結(jié)合參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展。研究證實(shí)，Caveolin-1參與了慢性肺炎、慢性纖維肌炎及炎癥性腸病等疾病的病理過程。然而關(guān)于Caveolin-1在非細(xì)菌性膀胱炎膀胱粘膜上皮組織中的表達(dá)及其與該病關(guān)系的研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究初步探討Caveolin-1在慢性非細(xì)菌性膀胱炎中的表達(dá)及其在發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮的作用，為深入研究Caveolin-1與NBC 發(fā)病的關(guān)系打下理

4、論基礎(chǔ)，為NBC的臨床治療提供新的思路。
　　 方法：
　　 1、建立慢性非細(xì)菌性膀胱炎患者入選標(biāo)準(zhǔn)，確定納入該項(xiàng)研究的患者，征得患者同意并簽署知情同意書；膀胱鏡下收集NBC患者的膀胱活檢組織及尿液標(biāo)本。
　　 2、采用熒光免疫組化染色和Westen blot等檢測膀胱活檢組織中Caveolin-1的表達(dá)情況，ELISA 檢測尿液中炎癥因子TNF-α、IL-6水平。
　　 3、小鼠Caveolin-1基因

5、的克隆及載體構(gòu)建：PCR 法擴(kuò)增 Cav-1cDNA 全長基因序列，將其克隆至慢病毒表達(dá)載體pRNAi-u2.6上并進(jìn)行慢病毒包裝。經(jīng)尾靜脈注射慢病毒載體pRNAi-u2.6-Cav-1轉(zhuǎn)染c57BL/6小鼠，3周后利用熒光顯微鏡及免疫組化法鑒定轉(zhuǎn)染情況。
　　 4、環(huán)磷酰胺腹腔注射c57BL/6小鼠(75mg/kg，每三天注射一次，共三次)誘導(dǎo)構(gòu)建慢性非細(xì)菌性膀胱炎動物模型。
　　 5、動物實(shí)驗(yàn)分組：生理鹽水組小鼠作為

6、實(shí)驗(yàn)對照設(shè)置為A組，pRNAi-u2.6-Cav-1慢病毒轉(zhuǎn)染成功后注射環(huán)磷酰胺的小鼠設(shè)置為B組，另設(shè)C組為單純環(huán)磷酰胺注射組小鼠。觀察各組小鼠排尿情況及組織病理學(xué)改變，并檢測相關(guān)炎癥指標(biāo)。
　　 主要結(jié)果：
　　 1、19例NBC患者入選該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究并成功收集樣本。利用熒光免疫染色和Westenblot方法成功檢測到13例NBC患者(68.4％)膀胱粘膜上皮表達(dá)Caveolin-1，7例正常對照組中僅有1例呈弱陽性表達(dá)

7、(14.3％)。推測Caveolin-1的表達(dá)與NBC的發(fā)病可能存在密切的相關(guān)性。
　　 2、成功構(gòu)建Caveolin-1轉(zhuǎn)基因小鼠模型及慢性非細(xì)菌性膀胱炎小鼠模型。
　　 3、Caveolin-1轉(zhuǎn)染后的c57BL/6小鼠在環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)下的膀胱炎模型與未轉(zhuǎn)染組相比較，從大體標(biāo)本看膀胱體積增大、肥厚，充血、水腫更明顯，膀胱濕重顯著增加；
　　 組織切片HE 染色觀察，前者粘膜層及粘膜下層明顯增厚，炎癥細(xì)胞浸潤更多

8、，粘膜連續(xù)性破壞也更明顯；組織炎癥因子(TNF-α，IL-6)的表達(dá)水平顯著增高。動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Caveolin-1極可能參與非細(xì)菌性膀胱炎的發(fā)病過程并且促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。
　　 結(jié)論：
　　 本研究從臨床篩選患者到動物實(shí)驗(yàn)兩部分驗(yàn)證Caveolin-1的表達(dá)與NBC的關(guān)系，結(jié)果高度提示Caveolin-1極可能參與NBC的發(fā)病過程并發(fā)揮重要作用，這為深入研究Caveolin-1在NBC 發(fā)病中的具體機(jī)制或信號通路等提供