肥大細胞在間質(zhì)性膀胱炎發(fā)病機制中作用的研究.pdf

1、目的：
　　1.探討間質(zhì)性膀胱炎(IC)患者膀胱粘膜組織中肥大細胞數(shù)量、性質(zhì)與盆腔癥狀評分(PUF)聯(lián)合應(yīng)用在間質(zhì)性膀胱炎診斷中的應(yīng)用價值。
　　2.檢測雌激素受體在IC患者膀胱粘膜大細胞上的表達情況；探討雌激素是否調(diào)控肥大細胞的激活從而引起肥大細胞脫顆粒，通過其所分泌的炎癥因子引起患者尿急、尿頻、疼痛等臨床癥狀。
　　3.通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用卵清蛋白表達系統(tǒng)，形成新的URO-OVA小鼠品系，表達卵清蛋白為其膀胱上皮自身

2、抗原。與先天性肥大細胞缺如小鼠(KitW-SH小鼠)進行雜交繁殖，形成膀胱上皮表達卵清蛋白為自身并先天缺如肥大細胞的URO-OVA/KitW-SH小鼠。小鼠注射卵清蛋白特異性T淋巴細胞后，使其膀胱出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，取其膀胱組織并與B6及URO-OVA小鼠進行比較，明確肥大細胞存IC中的作用和機制。
　　材料與方法：
　　具有尿急、尿頻、膀胱充盈后恥骨上區(qū)疼痛表現(xiàn)的IC患者膀胱活檢組織標本18例，12例正常膀胱組織標本作為對照組。

3、
　　1.膀胱組織標本分別應(yīng)用0.5％甲苯胺藍染色，光鏡下計數(shù)肥大細胞密度；鋨酸液固定標本，透射電鏡觀察肥大細胞與脫顆粒肥大細胞的超微結(jié)構(gòu)；統(tǒng)計學處理2組標本肥大細胞的浸潤密度、肥大細胞脫顆粒比率與兩組受試者PUF評分的相關(guān)性。
　　2.0.5％甲苯胺藍及透射電鏡下觀察肥大細胞與脫顆粒肥大細胞的超微結(jié)構(gòu)，并計算脫顆粒肥大細胞構(gòu)成比；多克隆抗人雌激素受體抗體標識標本膀胱黏膜上雌激素受體；統(tǒng)計學分析2組標本在肥大細胞數(shù)目、脫顆粒

4、肥大細胞比例及雌激素受體表達方面的差異。
　　3.形成轉(zhuǎn)基因膀胱上皮-卵清蛋白(URO-OVA)小鼠。與先天性肥大細胞缺如小鼠(KitW-SH小鼠)進行雜交繁殖成URO-OVA/KitW-SH小鼠。注射卵清蛋白特異性T淋巴細胞后，取其膀胱組織并與B6及URO-OVA小鼠進行病理改變、肥大細胞細胞因子等方面的比較及統(tǒng)汁學分析。
　　結(jié)果：
　　1.IC患者組PUF評分27.9±5.2分；正常對照組3.8±2.2分。2組比

5、較差異有統(tǒng)計學意義(t=14.736，P<0.01)。IC患者組肥大細胞數(shù)目為47-76個/mm2，平均28個/mm2；對照組為7-15個/mm2，平均10個/mm2。2組肥大細胞密度比較差異有統(tǒng)計學意義(Z=3.927，P<0.01)。IC組膀胱粘膜肥大細胞浸潤數(shù)量與盆腔癥狀評分無線性相關(guān)關(guān)系(rs=-0.618，P=0.601)。
　　2.IC組織標本中肥大細胞密度(5.59±3.40)個/HP，明顯高于對照組(2.48±2.

6、23)個/HP，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.787，P<0.01)；IC組織中75.3％的肥大細胞呈不同程度脫顆粒狀態(tài)，對照組未見明顯脫顆粒肥大細胞存在；IC組織標本中ER+細胞(3.77±3.03)個/HP，對照組ER+細胞(0.88±0.76)個/HP，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=3.870 P<0.01)；肥大細胞與雌激素受體陽性(ER+)細胞顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.884(P<0.01)。
　　3.靜脈注射活化的OT-I小

7、鼠CD8+T細胞之后URO-OVA小鼠在第7天(分數(shù)，3)和14天(得分，2)可以清楚地看到明顯的膀胱炎癥表現(xiàn)。肥大細胞數(shù)量增加2倍。而B6及URO-OVA/KitW-SH小鼠只有輕微膀胱炎癥表現(xiàn)。相關(guān)的肥大細胞所分泌的13種炎性因子分析，URO-OVA小鼠比URO-OVA/KitW-SH小鼠有明顯的增高。
　　結(jié)論：
　　1.IC組織中肥大細胞被激活脫顆粒后，顆粒中炎癥物質(zhì)釋放可能是IC產(chǎn)生膀胱痛疼綜合癥狀的重要因素，但不

8、是決定性因素。肥大細胞浸潤密度、肥大細胞激活脫顆粒狀態(tài)與PUF評分聯(lián)合應(yīng)用可作為診斷IC的重要工具之一。
　　2.IC患者組只有肥大細胞出現(xiàn)雌激素受體的過表達，肥大細胞為雌激素在IC患者膀胱黏膜上的重要靶點；雌激素可能通過其在肥大細胞上的受體表達來調(diào)控肥大細胞脫顆粒，產(chǎn)生間質(zhì)性膀胱炎特有的臨床癥狀。
　　3.雖然膀胱上皮表達了卵清蛋白做為自身抗原的URO-OVA小鼠沒有出現(xiàn)免疫反應(yīng)，但是轉(zhuǎn)基因卵清蛋白仍然具有抗原性。靜脈注射

9、活化的OT-I小鼠CD8+T細胞之后URO-OVA小鼠出現(xiàn)了明顯的膀胱自身免疫炎性反應(yīng)，病理檢查證實其與IC患者的膀胱組織發(fā)現(xiàn)相似。而B6及URO-OVA/KitW-SH小鼠沒有或只出現(xiàn)較輕的膀胱炎性反應(yīng)，這充分說明肥大細胞在IC的發(fā)病中起了關(guān)鍵的作用。相關(guān)的肥大細胞所分泌的13種炎性因子分析，URO-OVA小鼠比URO-OVA/KitW-SH小鼠有明顯的增高；更加確定了肥大細胞所分泌的炎性因子在引起IC的發(fā)病及臨床癥狀中起了重要作用。