鳙魚GABA受體的分離與純化.pdf

1、γ-氨基丁酸(GABA)是脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的抑制性遞質(zhì)，其傳遞作用由GABA受體介導(dǎo)，該受體是各種有機(jī)氯類以及氟蟲腈、阿維菌素類殺蟲劑的作用靶標(biāo)，還與人的許多神經(jīng)性疾病密切相關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道氟蟲腈等殺蟲劑對(duì)哺乳動(dòng)物安全無毒，但在具有高效殺蟲活性的同時(shí)，對(duì)魚類、蜜蜂等卻具有高毒性，說明魚類GABA受體與哺乳動(dòng)物存在差異。本文通過分離純化魚類的GABA受體，比較了魚類和哺乳動(dòng)物兩類脊椎動(dòng)物GABA受體的異同點(diǎn)，這對(duì)于篩選

2、高選擇性的環(huán)境友好型新農(nóng)藥具有相當(dāng)重要的作用。本文的研究成果如下:
　　 第一，本文首次選用我國四大家魚中養(yǎng)殖規(guī)模最大的鳙魚作為研究對(duì)象，比較六種去污劑溶出的GABA受體蛋白濃度，發(fā)現(xiàn)1％(V/V) Nonidet P-40溶出的蛋白量最多，達(dá)到729.01μg/mL。
　　 第二，以環(huán)氧基修飾的瓊脂糖(Sepharose6B)為基質(zhì)，偶聯(lián)經(jīng)典苯二氮卓類配體Ro7-1986/1，制備了親和層析介質(zhì);并通過硫代硫酸鈉滴定法

3、測(cè)得瓊脂糖上環(huán)氧基修飾密度達(dá)到66.8μmol/g膠，配體Ro7-1986/1的偶聯(lián)密度為63.12μmol/g膠。
　　 第三，利用制備的親和柱，結(jié)合超濾法，聚乙二醇透析法以及DEAE-sephacel離子交換層析法純化得到鳙魚腦中的GABA受體。得到的GABA受體由SDS-PAGE之后得到兩條清晰的條帶，經(jīng)Gel-Pro-Analyzer分析軟件分析其分子量分別為46 KDa和42 KDa，可能分別為鳙魚GABA受體的α和β

4、亞基，與哺乳動(dòng)物50 KDa左右的GABA受體亞基相差不大。并且，我們通過Bradford法測(cè)定純化后受體的濃度為4.6μg/mL。
　　 第四，通過異硫氰酸熒光素(FITC)修飾GABA得到熒光配體(FITC-GABA)。測(cè)得的FITC-GABA與鳙魚GABA受體粗提物的解離常數(shù)(Kd)和最大結(jié)合容量(Bmax)與哺乳動(dòng)物相比均較高，分別為88.89 nM，1.81 pM/mg蛋白，說明魚類GABA受體結(jié)合GABA的量更多，但