減重步行訓(xùn)練對大鼠脊髓不完全損傷后肢功能的影響.pdf

1、目的：
　　通過建立大鼠脊髓不完全損傷模型的步行訓(xùn)練模擬人體的步行訓(xùn)練來反映人體的單純康復(fù)訓(xùn)練的影響，旨在幫助臨床醫(yī)師對康復(fù)訓(xùn)練對功能恢復(fù)的正確認識。
　　方法：
　?、欧纸M：將75只成年雌性SD大鼠進行編號，采用隨機抽取號碼方法將以上大鼠隨機分為假手術(shù)組、脊髓損傷組及功能訓(xùn)練組，每組25只。⑵模型的制備：脊髓損傷組和功能訓(xùn)練組50只大鼠，均采用Allen打擊法造成脊髓不完全橫斷損傷，并逐層縫合。假手術(shù)組25只大鼠僅行

2、椎板切除，未進行脊髓損傷，并將切口各層組織進行逐層縫合。⑶康復(fù)訓(xùn)練：假手術(shù)組和脊髓損傷組大鼠未給予任何治療及步行康復(fù)訓(xùn)練；而功能訓(xùn)練組大鼠則僅給予嚴格的步行訓(xùn)練方案，具體訓(xùn)練方法如下：①時間：脊髓損傷后5d開始，每天1次，每周5次，周六、周日休息，共訓(xùn)練8周。②訓(xùn)練強度及持續(xù)時間，其中開始減重為大鼠體重50％，跑臺設(shè)速為5～10m/min，以后減重和速度視大鼠能力而定。⑷大鼠后肢功能BBB和ACOS評分：實驗大鼠每周均進行行為學(xué)評分一次

3、，采用雙人雙盲模式進行，時間固定在每周的周六下午2：00左右開始，直至術(shù)后第9周，具體時間為術(shù)前1d、7d和術(shù)后1d、7d、15d、30d、45d，由雙人采用雙盲法根據(jù)BBB和ACOS對各組動物進行行為學(xué)評定。⑸免疫組化：每組大鼠的16張2套切片中，其中1套切片免疫組化用于檢測組織內(nèi)神經(jīng)生長相關(guān)蛋白 GAP-43表達情況，另外1套切片免疫組化用于檢測EphA4免疫陽性細胞計數(shù)。
　　結(jié)果：
　?、判g(shù)后動物情況：本研究中成年雌

4、性SD大鼠共有75只，其中術(shù)后1周內(nèi)，假手術(shù)組死亡1只（死亡前具有腹脹癥狀），脊髓損傷組死亡3只（1只死亡前具有腹脹癥狀，另外2只死亡之前出現(xiàn)血尿等泌尿系統(tǒng)感染等癥狀），功能訓(xùn)練組死亡2只（死亡之前的臨床表現(xiàn)與脊髓損傷組類似），共死亡6只，實驗大鼠的死亡率為12.5%；術(shù)后1周后均未出現(xiàn)大鼠死亡情況的發(fā)生。
　　⑵行為學(xué)評定結(jié)果：①BBB評分結(jié)果:假手術(shù)組大鼠后肢運動功能從第一周其 BBB評分即較高，其得分為（14.10±1.00

5、）分，其第八周 BBB評分為（15.80±0.70）分，均顯著高于脊髓損傷組和功能訓(xùn)練組第八周 BBB評分；大鼠步行訓(xùn)練第一周，與脊髓損傷組相比較，功能訓(xùn)練組后肢運動功能BBB評分并無出現(xiàn)顯著性的差異（P>0.05）；步行訓(xùn)練第二周至第六周，功能訓(xùn)練組后肢運動功能恢復(fù)最快，第七周開始趨于穩(wěn)定，第八周其后肢運動功能BBB評分平均得分為（11.02±0.75）分，且該組后肢運動功能恢復(fù)程度均明顯好于脊髓損傷組（P<0.05）；脊髓損傷組第二

6、周開始其后肢運動功能可見明顯的恢復(fù)，但恢復(fù)速度和最后恢復(fù)程度均較慢，其第八周后肢運動功能 BBB評分平均得分僅為（9.68±0.62）分；隨著步行訓(xùn)練時間的延長功能訓(xùn)練組后肢運動功能BBB評分具有明顯提高的趨勢（P<0.05），但每個時間點的后肢運動功能BBB評分均低于同時間假手術(shù)組的BBB評分（P<0.05），但之間的差距越來越小。訓(xùn)練第一周脊髓損傷組與功能訓(xùn)練組兩組大鼠后肢運動功能恢復(fù)程度相近（P>0.05），較假手術(shù)組有非常顯著的

7、差異，且均顯著低于假手術(shù)組的恢復(fù)程度（P<0.05）；訓(xùn)練第二周后功能訓(xùn)練組與脊髓損傷組大鼠后肢運動功能逐漸恢復(fù)，且功能訓(xùn)練組恢復(fù)程度明顯快于脊髓損傷組（P<0.05），功能訓(xùn)練組與假手術(shù)組大鼠后肢運動功能之間的差異逐漸縮小。假手術(shù)組、功能訓(xùn)練組與脊髓損傷組都有明顯的恢復(fù)，但訓(xùn)練第2周后，功能訓(xùn)練組恢復(fù)速度明顯加快，至第七周開始趨于穩(wěn)定，且該組后肢運動功能 BBB評分，從第二周開始均顯著高于脊髓損傷組（P<0.05）。
　?、贏C

8、OS評分結(jié)果：假手術(shù)組大鼠后肢運動功能從第一周其 ACOS評分即較高，其得分為（80.02±10.81））分，其第八周 ACOS評分為（90.15±10.91）分，均顯著高于脊髓損傷組和功能訓(xùn)練組第八周 ACOS評分；大鼠步行訓(xùn)練第一周，與脊髓損傷組相比較，功能訓(xùn)練組后肢運動功能 ACOS評分并無出現(xiàn)顯著性的差異（P>0.05）；步行訓(xùn)練第二周開始至第七周，功能訓(xùn)練組后肢運動功能恢復(fù)速度最快，第七周后開始趨于穩(wěn)定，第八周其后肢運動功能

9、ACOS評分平均得分為（60.02±15.95）分；脊髓損傷組第二周開始其后肢運動功能可見明顯的恢復(fù)，但恢復(fù)速度和最后恢復(fù)程度均較慢，其第八周后肢運動功能 ACOS評分平均得分為（24.28±11.62）分；隨著步行訓(xùn)練時間的延長功能訓(xùn)練組后肢運動功能 ACOS評分具有明顯提高的趨勢（P<0.05），但每個時間點的后肢運動功能ACOS評分均低于同時間假手術(shù)組的ACOS評分（P<0.05），但之間的差距越來越小。訓(xùn)練第一周脊髓損傷組與功能

10、訓(xùn)練組兩組大鼠后肢運動功能恢復(fù)程度相近（P>0.05）；訓(xùn)練第二周后功能訓(xùn)練組與脊髓損傷組大鼠后肢運動功能逐漸恢復(fù)，且功能訓(xùn)練組恢復(fù)程度明顯快于脊髓損傷組（P<0.05）。
　?、敲庖呓M化結(jié)果①神經(jīng)生長相關(guān)蛋白 GAP-43：Ⅰ數(shù)量的變化:假手術(shù)組大鼠組織切片中GAP-43免疫陽性細胞數(shù)量為（1.7±0.9）個；脊髓損傷組GAP-43免疫陽性細胞數(shù)量第一周為（28.5±2.0）個，較假手術(shù)組明顯升高（P<0.05），第二周其數(shù)量達

11、到頂峰，為（31.0±2.1）個，第三周開始逐漸減少，第三周至第六周其減少速度最快，第七周開始趨于穩(wěn)定，第八周其數(shù)量為（6.0±1.7）個，明顯高于假手術(shù)組（P<0.05）；功能訓(xùn)練組第一周與第二周其GAP-43免疫陽性細胞數(shù)量與功能訓(xùn)練組相比較并無顯著的差異，第三周開始其也具有明顯下降趨勢，但各時間點數(shù)量均明顯高于脊髓損傷組（P<0.05），其第八周其數(shù)量為（13.0±1.2）個。Ⅱ染色輕度的變化：免疫組化結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠組織切

12、片中僅有少量的淺黃褐色 GAP-43蛋白顆粒出現(xiàn)；脊髓損傷組組織切片中GAP-43蛋白顆粒數(shù)量明顯增加，且第二周達到高峰，以后逐漸減小，但均明顯強于假手術(shù)組（P<0.05）；功能訓(xùn)練組大鼠第一周與第二周組組織切片中GAP-43蛋白顆粒染色強度與脊髓損傷組無顯著性差異（P>0.05），但第三周開始其染色強度均顯著高于脊髓損傷組（P<0.05）。②EphA4免疫陽性細胞免疫組化結(jié)果：假手術(shù)組EphA4免疫陽性細胞數(shù)量為（10.5±0.6）個

13、；功能訓(xùn)練組第一周其數(shù)量為（8.5±0.5）個，至第三周其具有明顯的減少趨勢，第三周至第六周其數(shù)量具有明顯增高趨勢，第七周至第八周其數(shù)量趨于穩(wěn)定，第八周數(shù)量為（13.0±0.3）個，該組大鼠第五周之前 EphA4免疫陽性細胞數(shù)量均明顯低于假手術(shù)組（P<0.05），第五周至第八周其數(shù)量均明顯高于假手術(shù)組（P<0.05）；脊髓損傷組第一周其數(shù)量為（8.1±0.6）個，前兩周具有明顯減少趨勢，第二周至第七周其數(shù)量具有明顯增高趨勢，第七周至第八

14、周其數(shù)量趨于穩(wěn)定，第八周數(shù)量為（17.5±0.8）個，該組大鼠第二周之前其EphA4免疫陽性細胞數(shù)量與功能訓(xùn)練組并無顯著性差異（P>0.05），第五周至第八周其數(shù)量均明顯高于功能訓(xùn)練組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?、挪叫杏?xùn)練可有效促進脊髓不完全損傷大鼠后肢功能的恢復(fù)效果。
　?、圃谠u定脊髓不完全損傷大鼠下肢功能的恢復(fù)效果時，ACOS評分的敏感性顯著高于BBB評分。
　　⑶脊髓損傷后，其可能誘導(dǎo)損傷區(qū)神經(jīng)生長