氟西汀對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞中ΔFosB表達(dá)的影響.pdf

1、前言: 轉(zhuǎn)錄因子△FosB是Fos家族的一名成員，是FosB基因的剪接變體，與Fos家族其它成員一樣，在接受急性刺激后，能夠短暫而迅速的在特定區(qū)域表達(dá)，在接受長(zhǎng)期刺激后，△FosB能夠在腦內(nèi)特定區(qū)域聚集，這些刺激包括成癮性藥物、抗抑郁藥物、抗精神病藥物等。由于△FosB具有獨(dú)特的穩(wěn)定性，一旦在腦內(nèi)被誘導(dǎo)產(chǎn)生，將會(huì)長(zhǎng)時(shí)間存在于腦內(nèi)。本研究發(fā)現(xiàn)原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)△FosB，氟西汀能夠增加△FosB的表達(dá)，且該作用具有濃度依賴(lài)

2、性和時(shí)間依賴(lài)性。原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)5-HT2A受體和5-HT2B受體，但是不表達(dá)5-HT2c受體和5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體。SB204741是5-HT2B受體的拮抗劑，能夠抑制氟西汀引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞中AFosB表達(dá)的上調(diào)。DOI是5-HTE2A/2C受體的激動(dòng)劑，長(zhǎng)期作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞，對(duì)AFosB的表達(dá)沒(méi)有影響。 目的: 1、原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)△FosB。 2、氟西汀對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞中△FosB表達(dá)的

3、影響。 3、5-HT2B受體是否參與氟西汀引起△FosB表達(dá)的變化。 方法: 原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞取材于新生一天的CD-1小鼠大腦半球，無(wú)菌分離大腦半球新皮質(zhì)，切割，震蕩，先后通過(guò)100μM和70μM的濾網(wǎng)，放入Falcon　Primaria培養(yǎng)皿中，將制備好的細(xì)胞放于37℃，二氧化碳/空氣(5％：95％)細(xì)胞培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)液為含有20％馬血清的DMEM，每隔3天更換一次培養(yǎng)液，第三次細(xì)胞換液，培養(yǎng)液中馬血清的

4、濃度改為10％。培養(yǎng)2周后，再加入0.25 mMdBcAMP促進(jìn)細(xì)胞分化成熟，一周后用于試驗(yàn)。 細(xì)胞經(jīng)氟西汀(5μM-60μM)、DOI(1μM)、SB204741(2μM)處理(30分鐘-7天)，檢測(cè)△FosB的表達(dá)水平。使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)△fosBmRNA的表達(dá)，用1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物，用Fluorchem 5500觀察結(jié)果。使用蛋白免疫印跡檢測(cè)△FosB蛋白表達(dá)水平，用掃描儀掃描顯出的色帶，Wind

5、ow AlphaEaseTM FC 32-bit分析軟件進(jìn)行灰度分析。使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組資料使用單向方差分析方法進(jìn)行比較，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)△FosB，使用濃度為5μM、10μM、20μM、40μM、60μM的氟西汀刺激細(xì)胞，1小時(shí)后收集細(xì)胞，當(dāng)氟西汀濃度為10μM時(shí)△fosB mRNA的表達(dá)水平開(kāi)始升高，并且具有濃度依賴(lài)性，當(dāng)濃度為40

6、 gM、60μM時(shí)△fosB mRNA表達(dá)的量約為對(duì)照組的200％，69μM與40μM相比△fosB mRNA表達(dá)不再升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、使用濃度為10μM的氟西汀刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞，分別在30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)后收集細(xì)胞，氟西汀使星形膠質(zhì)細(xì)胞中△fosB mRNA的表達(dá)水平增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、10μM氟西汀作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞，分別在1天、3天、7天收集細(xì)胞，氟西汀在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均能增加星形膠質(zhì)細(xì)胞

7、中△FosB蛋白的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 μM SB204741能夠抑制氟西汀引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞△FosB蛋白表達(dá)上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4、濃度為1μM的DOI作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞3天，對(duì)△FosB蛋白的表達(dá)水平?jīng)]有影響。 結(jié)論: 在原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞中存在△fosB mRNA和△FosB蛋白的表達(dá)。急性和慢性應(yīng)用抗抑郁藥物氟西汀能夠增加△fosB mRNA和△FosB蛋白的表達(dá)，而且這種作用具有