長(zhǎng)春花化學(xué)成分的分離及分析.pdf

1、目的：
　　 通過對(duì)長(zhǎng)春花（Catharanthus roseus (L.) Don）化學(xué)成分的分離及分析研究，以期達(dá)到以下目的：（1）建立長(zhǎng)春花中生物堿類成分的薄層分析，初步比較其生物堿類成分的組成；（2）對(duì)長(zhǎng)春花中的化學(xué)成分進(jìn)行分離與結(jié)構(gòu)鑒定；（3）建立長(zhǎng)春花中文多靈生物堿等化學(xué)成分的HPLC含量分析方法；（4）開展長(zhǎng)春花HPLC指紋圖譜的研究，為長(zhǎng)春花藥材的整體質(zhì)量控制提供可靠方法；（5）探討長(zhǎng)春花中文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿等生物

2、堿一年內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，及其長(zhǎng)春花生物堿的相關(guān)性，為長(zhǎng)春花GAP種植提供數(shù)據(jù)支持。
　　 方法：
　　 長(zhǎng)春花化學(xué)成分的薄層分析與分離：采用硅膠預(yù)制板，以甲醇-氯仿（9:1）為展開劑，文多靈、長(zhǎng)春堿等多種生物堿為對(duì)照品，改良碘化鉍鉀為顯色劑，對(duì)不同產(chǎn)地長(zhǎng)春花樣品進(jìn)行薄層分析；
　　 以無水乙醇對(duì)樣品進(jìn)行反復(fù)提取，過濾，合并濾液，并濃縮至流浸膏，采用硅膠柱色譜層析法，先后以石油醚:丙酮:氯仿（15:5:0.5）系統(tǒng)

3、與甲醇-氯仿（9:1.5）系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分離。
　　 長(zhǎng)春花中文多靈等成分的HPLC含量測(cè)定：以yilite C18柱（10mm, 4.6 mm x 250mm）為色譜柱，甲醇∶水（64∶36，以二乙胺調(diào)pH11）為流動(dòng)相；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，建立文多靈的HPLC分析方法。
　　 同時(shí)，以yilite C18柱（10mm, 4.6 mm x 250mm）為色譜柱，乙腈∶水（90∶10

4、）為流動(dòng)相，流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，建立了熊果酸的HPLC測(cè)定法。
　　 長(zhǎng)春花生物堿類成分的HPLC指紋圖譜研究：以yilite C18柱（10mm, 4.6 mm x 250mm）為分析柱，甲醇∶水（61∶39，以二乙胺調(diào)pH11）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，檢測(cè)時(shí)間為1h為分析條件，對(duì)樣品進(jìn)行了HPLC分析，并采用中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件對(duì)不同時(shí)間、不同部位以及不同品種長(zhǎng)春花色譜圖進(jìn)行相似性分析，對(duì)長(zhǎng)

5、春花的質(zhì)量進(jìn)行了整體評(píng)價(jià)。
　　 長(zhǎng)春花中文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿等生物堿類成分的含量動(dòng)態(tài)變化及其積累相關(guān)性研究：根據(jù)HPLC分析的結(jié)果，分析了在一年的生長(zhǎng)期內(nèi)文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿等生物堿積累的動(dòng)態(tài)變化；同時(shí)運(yùn)用SPSS軟件初步探討了長(zhǎng)春花生物堿積累的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 長(zhǎng)春花化學(xué)成分的薄層分析分析顯示，不同產(chǎn)地長(zhǎng)春花樣品中均含有生物堿，其中文多靈為主要成分，除香港的長(zhǎng)春花外，其他產(chǎn)地中的長(zhǎng)春質(zhì)堿也較為豐富，長(zhǎng)春堿

6、與長(zhǎng)春新堿較微弱。
　　 從長(zhǎng)春花樣品中分離得到了7個(gè)化合物，并根據(jù)理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)鑒定了其中的五個(gè)化合物，分別為其中CH-1為正三十烷,CH-3為二十五酸二十四烷酯，CH-4為1-甲基二十四烷醇，CH-5為二十八烷醇，CH-12為熊果酸。
　　 應(yīng)用建立的HPLC分析方法成功測(cè)定了不同來源的長(zhǎng)春花中文多靈生物堿的含量，結(jié)果表明不同來源的長(zhǎng)春花中文多靈含量存在差異。不同產(chǎn)地中文多靈生物堿的含量最高的為恩平，達(dá)1.848

7、 mg/g；不同品種中文多靈生物堿含量最高的為白花黃心品種，含量為0.934 mg/g。
　　 首次建立了長(zhǎng)春花中熊果酸的HPLC含量測(cè)定的方法，測(cè)定了長(zhǎng)春花不同部位中熊果酸的含量。其含量分別為：全草7.416 mg/g，葉15.427mg/g，莖6.980mg/g，花5.702mg/g。
　　 建立了長(zhǎng)春花的HPLC指紋圖譜，顯示有13個(gè)共有峰，方法學(xué)考察符合指紋圖譜技術(shù)要求。相似度計(jì)算表明，廣東不同時(shí)期采收長(zhǎng)春花的相

8、似度較大，達(dá)到0.9以上，不同部位與不同品種間的相似度較小。
　　 長(zhǎng)春花中文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿生物堿類成分含量的動(dòng)態(tài)變化及其積累的相關(guān)性分析表明： 一年的生長(zhǎng)時(shí)期中，長(zhǎng)春花文多靈生物堿的含量差異較大，莖中文多靈的含量在10-2月處于上升階段，2-9月總體處于下降階段。葉中文多靈的含量則在10-3月與4-9月，分別呈現(xiàn)上升與下降的趨勢(shì)。與莖、葉相比，花與果中文多靈生物堿的含量動(dòng)態(tài)變化較為復(fù)雜；花中長(zhǎng)春質(zhì)堿在10-11月份處于上升，在

9、11-2月份下降，2月份，含量開始上升，并在3-9月處于平緩階段。葉中長(zhǎng)春質(zhì)堿在1-4月份中，總體呈上升趨勢(shì)，在四月份達(dá)到最大值后急劇下降，在5-8月份，其含量又逐漸上升，在7-11月份中，長(zhǎng)春質(zhì)堿含量變化相對(duì)較為平緩。果中長(zhǎng)春質(zhì)堿含量主要集中在一年中的下半年，莖中幾乎不含長(zhǎng)春質(zhì)堿。
　　 相關(guān)性分析結(jié)果表明，文多靈生物堿的含量與長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春質(zhì)堿含量之間的相關(guān)系數(shù)分別為0.465、0.600，長(zhǎng)春質(zhì)堿的含量與長(zhǎng)春堿的含量相關(guān)系數(shù)

10、為0.471，相關(guān)性均顯著（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 ①確定了長(zhǎng)春花生物堿成分的薄層分析條件，該方法穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，
　　 并從長(zhǎng)春花中分離得到七個(gè)化合物。②建立了文多靈生物堿的HPLC分析方法，測(cè)定了不同產(chǎn)地不同品種長(zhǎng)春花中文多靈生物堿含量。③首次測(cè)定了長(zhǎng)春花中熊果酸含量，結(jié)果表明葉中含量最高，花中最低。④首次建立長(zhǎng)春花HPLC指紋圖譜方法，并同時(shí)考察了其中的文多靈、長(zhǎng)春質(zhì)堿等多種生物堿的含量，