化學(xué)指紋分析指導(dǎo)下的連翹化學(xué)成分分離.pdf

1、目的:
　　發(fā)展化學(xué)指紋分析指導(dǎo)下的高效制備色譜分離方法，用于中藥連翹化學(xué)成分分離，闡明其化學(xué)物質(zhì)組成，獲得化合物。
　　方法:
　　(1)建立超高壓色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-ToF)分析方法，進(jìn)行連翹提取物高分辨指紋圖譜分析，根據(jù)精確分子量推測主要成分。
　　(2)采用70％乙醇回流提取連翹藥材，減壓濃縮獲得總提取物，總提取物依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別減壓濃縮獲得乙酸乙酯和正丁醇部位，正丁醇部位上

2、大孔吸附樹脂柱分離，乙醇-水梯度洗脫，收集20％、40％和60％乙醇沖洗流分，獲得20％、40％和60％乙醇洗脫組分，高效液相色譜(HPLC)檢測各組分化學(xué)組成。各組分分別在分析型色譜上發(fā)展分離條件，采用高效制備色譜系統(tǒng)進(jìn)行制備分離，以C18色譜柱為分離工具，甲醇-水溶液作為流動相，紫外檢測器在線監(jiān)測，進(jìn)行制備分離。
　　(3)發(fā)展質(zhì)譜指導(dǎo)下的天然產(chǎn)物快速分離方法。以UPLC-Q-ToF分析為指導(dǎo)，發(fā)揮超高壓色譜分離能力強(qiáng)和飛行時(shí)

3、間質(zhì)譜可提供精確分子量的特點(diǎn)，對色譜峰進(jìn)行分離并通過精確分子量推測分子式，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫檢索，篩選未在連翹中報(bào)道分子式，以該分子量對應(yīng)化合物為目標(biāo)，完成有指導(dǎo)的化合物快速分離。
　　結(jié)果:
　　(1)獲得連翹提取物高分辨指紋圖譜，提取經(jīng)過良好分離色譜峰的精確分子量，根據(jù)文獻(xiàn)檢索，推測22個(gè)色譜峰分子式和化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　(2)連翹正丁醇部位經(jīng)大孔吸附樹脂層析分離獲得20％、40％和60％三個(gè)洗脫組分，經(jīng)色譜分析發(fā)現(xiàn)20％乙醇

4、洗脫組分主要含有環(huán)己醇苷類化合物，40％乙醇洗脫組分主要含有連翹脂苷為代表的苯乙醇苷類化合物，60％乙醇沖洗部位含有連翹苷為代表的木脂素類化合物。采用高效制備柱分離純化獲得15個(gè)化合物，分別是:從20％乙醇洗脫組分獲得連翹環(huán)己醇苷(1)、連翹酸-1-O-葡萄糖苷(2);從40％乙醇洗脫組分獲得阿克苷(3)、連翹脂苷A(4)和連翹脂苷H(5);從60％乙醇洗脫組分獲得松脂苷-4-O-葡萄糖苷(6)、表松脂苷-4-葡萄糖苷(7)、連翹苷(8

5、)、連翹脂素(9)、松脂素(10)、松脂素甲醚(11)、表松脂素(12)、熊果酸(13)、齊墩果酸(14)、谷甾醇(15)。
　　(3)以高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析為基礎(chǔ)，篩選潛在新化合物，針對性完成未知成分制備，首次從連翹中獲得2個(gè)新化合物，分別為4-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)ethyl]-4-hydroxy-2-Cyclohexen-l-one(16)和4-[2-(β-D-glucopyranosyloxy)