杜鵑花屬植物的RAPD標記研究.pdf

1、本研究對RAPD-PCR的反應體系進行了優(yōu)化，并利用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)技術，對24種杜鵑花屬(Rhododendron)植物進行基因組多態(tài)性分析。共篩選了60個隨機引物，其中4個隨機引物的擴增產(chǎn)物多態(tài)性明顯，獲得清晰重復性好的條帶。在NTSYS-pc軟件中，統(tǒng)計擴增產(chǎn)物條帶數(shù)，用來計算Jaccard遺傳相似系數(shù)和遺傳距離，建立UMPGA聚類分析圖。結果表明：1.獲得較好的反應程序和反應體系為：反應程序為：95℃預變性1mi

2、n；94℃變性1min；34℃退火1min;72℃延伸2min；45個循環(huán)；72℃延伸5min；4℃保存?！　》磻w系(20μl反應體系)為：模板DNA(10ng/μl)1.5μl；10×PCRbuffer2μl；Taq酶(0.5U/μl)0.3μl；Primer(0.8Pmol/μl)4μl；MgCl2(25mmol/L)1.8μl；dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0Nmol/μl)0.6μl。2.隨機引物

3、P15、U7、U10和X3四個引物對24種杜鵑花屬(RhododendronL.)植物擴增的條帶在10～15之間，多態(tài)性條帶在9～14條之間，平均每條引物擴增出12條帶；引物U10是擴增出多態(tài)性最多的引物，多態(tài)性占93.33％。3.用4個隨機引物對24種杜鵑花屬植物進行RAPD擴增，所得產(chǎn)物顯示了豐富的多態(tài)性，表明杜鵑花屬植物種間遺傳基礎相當復雜；對RAPD產(chǎn)物進行統(tǒng)計的相似系數(shù)分析和聚類分析結果同形態(tài)分類學基本吻合，說明RAPD技術在