福建杜鵑花遺傳多樣性ISSR分析及其離體保存.pdf

1、本研究收集了7份杜鵑花科花卉資源,以九仙山野生丁香杜鵑葉片為外植體,建立了杜鵑花科花卉的離體再生體系。并以二喬杜鵑試管苗為材料,通過限制生長保存方法研究杜鵑花離體保存,期望為杜鵑花科花卉離體再生體系的建立以及離體種質保存提供科學資料；利用ISSR分子標記技術對在福建收集的15份杜鵑材料進行遺傳多樣性分析。并對旗山國家森林公園的兩個馬銀花群體進行群體多態(tài)性分析。主要研究結果有:
　　 1.杜鵑花科花卉離體再生體系的建立以九仙山野生

2、丁香杜鵑葉片為外植體,分別研究其消毒、愈傷誘導、愈傷誘導不定芽、試管苗增殖、試管苗生根的最佳條件。實驗結果得到:最佳消毒方法為75％酒精(20s)+0.1％的HgCl2(4 min)+無菌水+0.1％的HgCl2(4 min)；最佳愈傷誘導培養(yǎng)基為1／4MS+1.0mg／L TDZ+0.10 mg／LNAA,誘導率達到95.58％;最佳誘導不定芽培養(yǎng)基為1／4MS+1.0 mg／LZT+0.05 mg／L,分化率達到90.67％；最佳增

3、殖培養(yǎng)基為1／4MS+1.5 mg／L ZT+0.1 mg／L,增值系數(shù)達到8.2；最佳生根培養(yǎng)基為1／2WPM+NAA1.0+IBA0.05,生根率達到85.1％。
　　 2.杜鵑花科花卉試管苗離體保存的研究選取二喬杜鵑生長2個月左右試管苗為供試材料,探討不同濃度的瓊脂、蔗糖、B9、不同培養(yǎng)基成分及不同光照強度等因素對試管苗限制生長保存的影響,試驗結果表明:在1／6MS培養(yǎng)基中添加50g／L蔗糖與9.5g·L-1瓊脂濃度保存效

4、果較好,保存8個月時,存活率為70.6％,在添加B91.5g·L-1后大大延長了保存時間,保存12個月存活率達到70.5％;光照強度對保存沒有顯著影響。
　　 3.福建杜鵑花屬主要種類遺產多樣性ISSR分析采用ISSR分子標記技術對15份杜鵑花科花卉進行遺傳多樣性分析。結果表明:選出的11條ISSR引物總共擴增出83條帶,擴增帶在6～11條之間,平均產生7.6條擴增帶；總共擴增出的多態(tài)性譜帶為68條,多態(tài)性比率為82.0％,說明

5、了此15份杜鵑種質間存在較大的遺傳差異且遺傳多樣性高,具有豐富的多態(tài)性。根據擴增條帶的多態(tài)性,構建了杜鵑花科花卉的親緣關系樹狀圖,當遺傳距離為0.56,15份杜鵑花可分為5大類群:第1類包括馬銀花、二喬杜鵑品種1、二喬杜鵑品種2、二喬杜鵑品種3、鹿角杜鵑；第2類只有云錦杜鵑,即云錦杜鵑單獨成為一類。第3類只有猴頭杜鵑,即猴頭杜鵑單獨成一類；第4類包括毛果杜鵑、丁香杜鵑、黑葉杜鵑、紫薇春杜鵑、鹿角杜鵑、高山杜鵑:第5類為滿山紅和映山紅。當

6、遺傳距離為0.59,15份杜鵑花可分為2大類群:第1類包括馬銀花、二喬杜鵑3個品種、鹿角杜鵑、云錦杜鵑.第2類包括毛果杜鵑、黑葉杜鵑、猴頭杜鵑、丁香杜鵑、高山杜鵑、紫薇春杜鵑、溪蚌杜鵑。
　　 4.福建旗山國家森林公園馬銀花群體的ISSR分析采用ISSR技術對旗山2個馬銀花群體(東陽湖群體和梅雨潭瀑布群體)進行遺傳多樣性分析。結果表明:根據Nei's指數(shù),兩個群體總的遺傳多樣性為Ht=0.3901,群體間遺傳多樣性Ht=0.39