杜鵑花屬藥用植物DNA條形碼的鑒定研究.pdf

1、DNA條形碼技術(shù)是利用一段(或幾段)通用的、相對(duì)較短且具有足夠變異的易擴(kuò)增的DNA片段對(duì)物種進(jìn)行鑒定，它是依據(jù)DNA片段在物種內(nèi)的特異性和種間的多樣性而創(chuàng)建的一種新的物種鑒別方法，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)物種的快速和較客觀的鑒定。本文選用生物多樣性豐富且藥用資源較多的杜鵑花屬植物作為對(duì)象進(jìn)行DNA條形碼鑒定研究。
　　 為評(píng)價(jià)和比較幾個(gè)熱點(diǎn)推薦的DNA條形碼候選序列對(duì)杜鵑花屬藥用植物的鑒定作用，本研究首先對(duì)杜鵑花屬38個(gè)物種68份樣品的psb

2、A-trnH、rbcL、matK核ITS2序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序，比較各序列擴(kuò)增成功率和測(cè)序成功率、種內(nèi)和種間變異，進(jìn)行barcoding gap分析，采用BLAST1和Nearest Distance方法評(píng)價(jià)四個(gè)不同序列的鑒定能力。結(jié)果顯示：psbA-trnH序列在所研究的杜鵑花屬藥用植物中的測(cè)序成功率為86.8％，rbcL序列為89.7％，核ITS2序列僅為50％；psbA-trnH序列提供了最大種間變異且Wilcoxon檢驗(yàn)表明

3、其種間最小變異明顯大于其種內(nèi)最大變異，較有利于物種的鑒別；barcoding gap與其他DNA條形碼候選序列相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)，psbA-trnH序列在杜鵑花屬(59個(gè)樣品)中的鑒定成功率可達(dá)到100％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于rbcL(59％)和核ITS2(41.2％)的鑒定成功率。將psbA-trnH序列擴(kuò)大應(yīng)用至94個(gè)樣品，依然具有93.6％的鑒定成功率，即使對(duì)于其中不能鑒定到種的6個(gè)樣本，psbA-trnH序列亦可以縮小其分類范圍至一個(gè)亞屬甚

4、至是一個(gè)組或一個(gè)亞組，將其確定到一個(gè)較小的分類范圍，具有一定鑒定意義。因此，psbA-trnH序列可以作為這四個(gè)序列中杜鵑花屬植物條形碼首先推薦的序列。
　　 有關(guān)杜鵑花屬的屬下分類一直存在爭(zhēng)議，由于psbA-trnH序列在杜鵑花屬物種的鑒定方面表現(xiàn)出了較好的鑒定能力，本研究運(yùn)用psbA-trnH序列的測(cè)序結(jié)果，選用杜鵑花屬7個(gè)亞屬37個(gè)物種的樣本，用MEGA4.0進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，并構(gòu)建聚類樹，對(duì)杜鵑花屬各個(gè)亞屬的分類地位進(jìn)行

5、了探討，為進(jìn)一步深入研究杜鵑花屬植物的親緣關(guān)系提供分子系統(tǒng)學(xué)證據(jù)。結(jié)果表明杜鵑花屬37個(gè)種的樣本聚為7枝，與《中國(guó)植物志》上分類系統(tǒng)相符，支持《中國(guó)植物志》杜鵑花屬下亞屬的分類系統(tǒng)。這也從系統(tǒng)進(jìn)化的角度，證實(shí)了psbA-trnH序列在杜鵑花屬植物分類和鑒定中的作用。
　　 杜鵑花屬藥用植物同名異物、同物異名現(xiàn)象嚴(yán)重，混淆品和偽品較多，ITS2片段在中藥材的物種鑒定方面具有潛在的研究?jī)r(jià)值。本文考察利用ITS2序列對(duì)杜鵑花屬10種常