杜鵑花屬藥用植物DNA條形碼的鑒定研究.pdf

1、DNA條形碼技術(shù)是利用一段(或幾段)通用的、相對較短且具有足夠變異的易擴(kuò)增的DNA片段對物種進(jìn)行鑒定，它是依據(jù)DNA片段在物種內(nèi)的特異性和種間的多樣性而創(chuàng)建的一種新的物種鑒別方法，能夠?qū)崿F(xiàn)對物種的快速和較客觀的鑒定。本文選用生物多樣性豐富且藥用資源較多的杜鵑花屬植物作為對象進(jìn)行DNA條形碼鑒定研究。
　　 為評價和比較幾個熱點推薦的DNA條形碼候選序列對杜鵑花屬藥用植物的鑒定作用，本研究首先對杜鵑花屬38個物種68份樣品的psb

2、A-trnH、rbcL、matK核ITS2序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測序，比較各序列擴(kuò)增成功率和測序成功率、種內(nèi)和種間變異，進(jìn)行barcoding gap分析，采用BLAST1和Nearest Distance方法評價四個不同序列的鑒定能力。結(jié)果顯示：psbA-trnH序列在所研究的杜鵑花屬藥用植物中的測序成功率為86.8％，rbcL序列為89.7％，核ITS2序列僅為50％；psbA-trnH序列提供了最大種間變異且Wilcoxon檢驗表明

3、其種間最小變異明顯大于其種內(nèi)最大變異，較有利于物種的鑒別；barcoding gap與其他DNA條形碼候選序列相比具有明顯的優(yōu)勢，psbA-trnH序列在杜鵑花屬(59個樣品)中的鑒定成功率可達(dá)到100％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于rbcL(59％)和核ITS2(41.2％)的鑒定成功率。將psbA-trnH序列擴(kuò)大應(yīng)用至94個樣品，依然具有93.6％的鑒定成功率，即使對于其中不能鑒定到種的6個樣本，psbA-trnH序列亦可以縮小其分類范圍至一個亞屬甚

4、至是一個組或一個亞組，將其確定到一個較小的分類范圍，具有一定鑒定意義。因此，psbA-trnH序列可以作為這四個序列中杜鵑花屬植物條形碼首先推薦的序列。
　　 有關(guān)杜鵑花屬的屬下分類一直存在爭議，由于psbA-trnH序列在杜鵑花屬物種的鑒定方面表現(xiàn)出了較好的鑒定能力，本研究運(yùn)用psbA-trnH序列的測序結(jié)果，選用杜鵑花屬7個亞屬37個物種的樣本，用MEGA4.0進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析，并構(gòu)建聚類樹，對杜鵑花屬各個亞屬的分類地位進(jìn)行

5、了探討，為進(jìn)一步深入研究杜鵑花屬植物的親緣關(guān)系提供分子系統(tǒng)學(xué)證據(jù)。結(jié)果表明杜鵑花屬37個種的樣本聚為7枝，與《中國植物志》上分類系統(tǒng)相符，支持《中國植物志》杜鵑花屬下亞屬的分類系統(tǒng)。這也從系統(tǒng)進(jìn)化的角度，證實了psbA-trnH序列在杜鵑花屬植物分類和鑒定中的作用。
　　 杜鵑花屬藥用植物同名異物、同物異名現(xiàn)象嚴(yán)重，混淆品和偽品較多，ITS2片段在中藥材的物種鑒定方面具有潛在的研究價值。本文考察利用ITS2序列對杜鵑花屬10種常