真菌蛋白激發(fā)子PeaT1規(guī)模化發(fā)酵工藝及產(chǎn)品質(zhì)量檢測技術(shù)研究.pdf

1、PeaT1蛋白是從極細(xì)鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)中提取的一種蛋白激發(fā)子，能誘導(dǎo)多種作物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性。試驗(yàn)表明PeaT1蛋白制劑對水稻、小麥、白菜、芹菜等都具有明顯的促生長、增產(chǎn)、提高果實(shí)品質(zhì)和抗病抗逆的效果。為規(guī)模化生產(chǎn)穩(wěn)定的PeaT1蛋白制劑，對其工廠化生產(chǎn)發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行了深入研究。根據(jù)極細(xì)鏈格孢菌的營養(yǎng)需求，通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對該菌的培養(yǎng)基進(jìn)行了改進(jìn)和優(yōu)化，并進(jìn)行了500L、5T和20T發(fā)酵罐的逐級發(fā)酵，

2、獲得了理想的蛋白制劑產(chǎn)品。使用高效液相色譜法、電泳法和比色法對制劑中的蛋白進(jìn)行了定性和定量檢測，并進(jìn)行了蛋白制劑和復(fù)配配方的室內(nèi)生測，具體研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了PeaT1蛋白工廠化生產(chǎn)的培養(yǎng)基配方。本文通過對蛋白激發(fā)子PeaT1的工廠化生產(chǎn)工藝研究，將極細(xì)鏈格孢菌的實(shí)驗(yàn)室級發(fā)酵培養(yǎng)進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化，通過正交試驗(yàn)確定了配方:木薯粉3.5％、黃豆粉1％、蔗糖0.5％、蛋白胨0.5％、味精0.5％、硫酸銨0.2％、硫酸亞鐵0.0

3、2％、硫酸鎂0.02％。
　　2.實(shí)現(xiàn)了500L、5000L和20000L發(fā)酵罐發(fā)酵參數(shù)的逐級放大。對500L、5T和20T發(fā)酵罐發(fā)酵參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn)，掌握了其發(fā)酵時(shí)間分別為40h、26h和20h。對發(fā)酵過程中的動(dòng)態(tài)參數(shù)進(jìn)行監(jiān)控，得到了pH值、溶氧量、溫度等指標(biāo)的動(dòng)態(tài)曲線。
　　3.建立了蛋白產(chǎn)品中PeaT1的檢測技術(shù)。通過HPLC、SDS-PAGE的方法對制劑進(jìn)行蛋白成分分析，鑒定出產(chǎn)品中PeaT1蛋白成分，為產(chǎn)品有效成分檢測

4、提供了鑒定方法。建立基于BrMford法對產(chǎn)品有效成分含量的快速檢測技術(shù)，為產(chǎn)品含量提供了檢測方法，為規(guī)?；l(fā)酵生產(chǎn)提供了質(zhì)量控制手段。
　　4.通過室內(nèi)生測對工業(yè)設(shè)備制得的PeaT1蛋白制劑穩(wěn)定性進(jìn)行檢測。通過將PeaT1制劑對小麥、玉米種子進(jìn)行浸種處理，發(fā)現(xiàn)各批次較清水對照均有明顯提高，各批次間差異不顯著，證明工業(yè)化生產(chǎn)的制劑穩(wěn)定可靠。
　　5.確定了蛋白激發(fā)子PeaT1與井岡霉素復(fù)配的最佳配比。將蛋白激發(fā)子PeaT1制