聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)因子對周圍神經(jīng)再生的影響及其可視化研究.pdf

1、重慶大學(xué)博士學(xué)位論文聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)因子對周圍神經(jīng)再生的影響及其可視化研究姓名：陳菁申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：彭承琳20051001重慶大學(xué)博士學(xué)位論文II共表達(dá)成像涉及神經(jīng)營養(yǎng)因子的探針設(shè)計(jì)、探針標(biāo)記和導(dǎo)入、與靶基因的特異性結(jié)合以及雜交信號的探測顯示等相關(guān)步驟。探針的特異性、探針濃度、導(dǎo)入細(xì)胞的探針數(shù)量是決定成像信號信噪比的關(guān)鍵因素。(2)通過熒光素標(biāo)記探針、電轉(zhuǎn)法導(dǎo)入探針、活細(xì)胞內(nèi)的多色熒光原位雜交、激光共聚焦細(xì)

2、胞斷層掃描和計(jì)算機(jī)圖像分析，建立了多種神經(jīng)營養(yǎng)因子共表達(dá)的可視化和數(shù)量化檢測分析方法。(3)NGF、CNTF和GDNFmRNA的共表達(dá)可同時(shí)定位于單個(gè)雪旺細(xì)胞；感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與雪旺細(xì)胞共培養(yǎng)體系中撤除感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元后，NGF和GDNF表達(dá)在迅速下降后隨即逐漸增高，但2周時(shí)仍低于共培養(yǎng)表達(dá)水平(P0.01)，CNTF表達(dá)則持續(xù)下降(P0.01)。(4)本課題設(shè)計(jì)的多色熒光原位雜交圖像的合成及分析程序既適用于激光共聚焦掃描信號，也適用于

3、普通熒光顯微鏡攝取的圖像，能對三種以上基因的表達(dá)區(qū)域進(jìn)行細(xì)胞共定位顯示和定量分析。(5)NGF、CNTF和GDNF在提高神經(jīng)元存活、促進(jìn)神經(jīng)元胞體發(fā)育、促進(jìn)神經(jīng)元突起發(fā)育和突起延伸四個(gè)指標(biāo)中各具優(yōu)勢，具有協(xié)同作用。(6)根據(jù)NGF和GDNF在損傷后早期迅速下降但隨即逐漸增高、而CNTF在神經(jīng)損傷早期表達(dá)持續(xù)減少的變化特點(diǎn)，確定了局部應(yīng)用醫(yī)用幾丁糖凝膠作為神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF、CNTF和GDNF的緩釋劑并結(jié)合靶肌肉注射CNTF至術(shù)后一月的用

4、藥方式，該治療措施對大鼠坐骨神經(jīng)缺損后的神經(jīng)纖維再生和功能恢復(fù)有良好的促進(jìn)作用。(7)對大鼠坐骨神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)三維重建過程中的組織固定、定位標(biāo)志、連續(xù)切片制備、切片染色、圖像配準(zhǔn)等步驟進(jìn)行了探討，摸索出一套獲取神經(jīng)組織連續(xù)切片圖像的方法，并結(jié)合SGI圖像工作站三維重建系統(tǒng)的體繪制方法，初步建立了一種周圍神經(jīng)損傷后再生神經(jīng)組織顯微結(jié)構(gòu)的可視化研究手段。(8)大鼠坐骨神經(jīng)再生過程中神經(jīng)纖維的三維圖像重建結(jié)果能直觀、形象地揭示聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)營養(yǎng)因