角膜上皮細胞表達神經(jīng)營養(yǎng)因子促進角膜神經(jīng)再生的作用研究.pdf

1、目的：通過正常小鼠和鏈脲佐菌素(STZ)誘導的Ⅰ糖尿病小鼠的角膜上皮損傷模型以及小鼠角膜上皮干/祖細胞-三叉神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元（TKE2細胞-TG細胞）體外共培養(yǎng)模型，檢測小鼠角膜上皮細胞中神經(jīng)營養(yǎng)因子(neurotrophic factors)的表達情況，研究其對小鼠角膜神經(jīng)再生的影響。
　　方法：用C57/BL6小鼠建立角膜上皮損傷模型，檢測并比較小鼠正常角膜（角膜上皮損傷未損傷）、再生期（角膜上皮損傷后2天）以及再生后（角膜上

2、皮損傷后7天）角膜上皮細胞中神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達。體外培養(yǎng)小鼠角膜上皮干/祖細胞（TKE2細胞），利用劃痕模型檢測正常及損傷后TKE2細胞中神經(jīng)生長因子(NGF)和膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)生長因子(GDNF)的表達變化。通過TKE2細胞-TG細胞體外共培養(yǎng)模型，檢測三叉神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元（TG細胞）軸突生長變化。利用鏈脲佐菌素(STZ)誘導Ⅰ型糖尿病小鼠，通過角膜上皮損傷修復模型，檢測糖尿病小鼠角膜上皮中NGF和GDNF表達變化;觀察糖尿病小鼠角膜

3、上皮修復和神經(jīng)再生以及外源性NGF和GDNF對糖尿小鼠角膜上皮修復、神經(jīng)再生和角膜神經(jīng)敏感度恢復的影響。
　　結(jié)果：在角膜上皮修復和角膜神經(jīng)再生過程中，與正常角膜相比，角膜上皮中NGF和GDNF的表達在角膜上皮再生期（角膜上皮損傷后2天）顯著上升，再生后（損傷后第7天）部分恢復;而NGF中和抗體或GDNF封閉多肽可顯著抑制角膜上皮損傷修復及神經(jīng)再生。與正常對照組相比，TKE2細胞損傷后（劃痕實驗48h）NGF和GDNF的表達顯著上

4、升，且劃痕后的條件培養(yǎng)上清可以顯著促進TG細胞軸突的生長;而NGF中和抗體或GDNF封閉多肽可顯著抵消TKE2條件培養(yǎng)上清的促進TG細胞軸突生長的作用。微流體小室共培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示，TKE2細胞及其條件培養(yǎng)基可以顯著促進小鼠TG細胞的軸突的生長，且呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　與正常小鼠相比，糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復及神經(jīng)再生均顯著延遲;糖尿病小鼠再生期的角膜上皮NGF和GDNF的表達均顯著下降;而外源性給予NGF或GDNF均可顯著促進