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文檔簡介
1、目的:研究神經(jīng)再生條件液(NRCF)中具有神經(jīng)再生趨化活性的蛋白成分,重點(diǎn)對(duì)232~440 kDa蛋白條帶進(jìn)行分離和定性。對(duì)其中可能具有趨化活性的成分進(jìn)行神經(jīng)生物活性檢測。 方法: 1) 建立兔坐骨神經(jīng)再生室模型,采集NRCF進(jìn)行自然膠電泳分離,并切取232~440 kDa蛋白條帶。 2) 采用鳥槍(Shotgun)蛋白質(zhì)組學(xué)策略對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。 3) 在培養(yǎng)的鼠大腦皮層神經(jīng)元中加入外源性C3蛋白,WS
2、T–8法檢測其對(duì)神經(jīng)元的活力影響。選用β-Tubulin和MAP2兩種免疫熒光染色區(qū)分神經(jīng)元樹突和軸突,并應(yīng)用神經(jīng)元形態(tài)分析軟件Neurolucida 對(duì)神經(jīng)元突起長度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 1) 在神經(jīng)再生室獲取NRCF約800μl。電泳結(jié)果顯示在232~440kDa間有1條蛋白條帶。 2) Shotgun質(zhì)譜分析該條帶鑒定出54種蛋白。其中不存在已知的神經(jīng)生長因子。應(yīng)用功能域篩選發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體C3樣因子的C末端和神
3、經(jīng)突起生長因子Netrin的C末端同樣存在NTR組件。 3) 低劑量(1~5μg/ml )補(bǔ)體C3對(duì)神經(jīng)元存活率與對(duì)照組無差異,但明顯增加鼠大腦皮層神經(jīng)元軸突和樹突長度,尤以1μg/ml C3處理組軸突增長最顯著(約60%);C3a受體拮抗劑SB290157拮抗補(bǔ)體C3的促突起生長作用。 結(jié)論: 1) 本研究初步支持NRCF中232~440kDa蛋白條帶中的C3樣蛋白可作為一具有神經(jīng)生物活性的因子進(jìn)行深入研究。
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