基因槍法和農(nóng)桿菌-花器浸蘸法將CYCD2基因?qū)胄←湹难芯?pdf

1、CycD2是一種植物細胞周期相關(guān)蛋白基因，Cockcroft(2000)等將CycD2基因轉(zhuǎn)入煙草中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因煙草中CycD2表達量的增加導(dǎo)致細胞分裂速率加快，同時轉(zhuǎn)基因植株地上部的生長速率也比對照加快一倍。目前還尚未見有將CycD2基因?qū)胄←湹南嚓P(guān)報道。本研究采用基因槍法和農(nóng)桿菌花器浸蘸法將CycD2基因?qū)胄←?，主要研究結(jié)果如下： 在本實驗室王小霞(2006)工作基礎(chǔ)上，對通過基因槍法獲得的轉(zhuǎn)基因植株(MY11-CycD

2、2)T<,1>代進行了分子生物學(xué)檢測，PCR檢測結(jié)果表明只有部分后代植株含有轉(zhuǎn)化的CycD2基因片段，而Southern-blot鑒定結(jié)果表明CycD2基因在T<,1>代中沒有整合到小麥核基因組中；對轉(zhuǎn)基因植株T<,2>代進行農(nóng)藝性狀調(diào)查發(fā)現(xiàn)：大部分T<,2>代轉(zhuǎn)基因植株株型正常，能夠正常結(jié)實盡管植株感白粉病的現(xiàn)象較為嚴重，但轉(zhuǎn)基因植株間植株高度有較大差異，其中有4個轉(zhuǎn)基因植株的株高比其它正常植株矮10cm左右并且觀察到穗頸長度有明顯縮

3、短，多重比較結(jié)果顯示T<,2>代轉(zhuǎn)基因植株間植株高度差異已達到顯著水平。 在運用農(nóng)桿菌花器浸蘸法將CycD2基因?qū)胄←湹倪^程中，主要對菌液接種方法進行了一些改進和比較，確定了合適的遺傳霉素(G418)篩選濃度并且獲得25個抗性植株，但PCR檢測未能擴增出特異性條帶；而對T<,1>植株的農(nóng)藝性狀考察結(jié)果發(fā)現(xiàn)：大部分植株的生長發(fā)育與報道的一些轉(zhuǎn)基因植株的情況比較類似，其中還觀察到了有一些植株的部分葉片呈現(xiàn)出無規(guī)卷曲，還有一些植株的