利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將pta和sb401基因?qū)敫仕{(lán)型油菜的研究.pdf

1、本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將構(gòu)建于同一表達(dá)載體的抗油菜蚜蟲等同翅目害蟲的半夏凝集素pta基因和富含賴氨酸的馬鈴薯花粉特異水溶性蛋白基因sb401轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型雙低油菜中，主要成果如下：1.選擇四川目前推廣的中雙6號等8個甘藍(lán)型雙低常規(guī)油菜品種作為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化受體材料，設(shè)置了8種激素配比組合，通過選擇基本培養(yǎng)基、無菌苗的苗齡、下胚軸切段長度等因素探討其對植株再生的影響，確定了以MS+6-BA1mg/L+2.4-D0.5mg/L培養(yǎng)基作為下胚軸分化的

2、預(yù)培養(yǎng)基，以MS+1～4mg/L6-BA+0.05～0.4mg/LNAA為分化培養(yǎng)基，初步建立了不同油菜品種下胚軸的高效再生體系。應(yīng)用該再生系統(tǒng)，中雙6號等四個品種的分化率可達(dá)40.67～69.67％。2.在建立高效再生系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步建立了油菜下胚軸的遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。3.應(yīng)用上述遺傳轉(zhuǎn)化體系，將構(gòu)建在同一載體(pDB13PS)T-DNA上的pta和sb401基因?qū)胗筒似贩N中雙9號、中雙7號、中雙6號、川油18中，共獲得了79株T0

3、代轉(zhuǎn)基因潮霉素抗性再生植株。4.提取T0代轉(zhuǎn)基因植株DNA，用選擇標(biāo)記基因hyg引物經(jīng)PCR擴(kuò)增，有26株擴(kuò)增出與陽性對照相同的目標(biāo)片段(832bp)，隨機(jī)抽取5株hyg陽性株，以目的基因pta、sb401引物經(jīng)PCR擴(kuò)增，均得到了417bp、810bp大小的擴(kuò)增片段，初步表明外源基因已整合進(jìn)了油菜基因組中，進(jìn)一步Southern雜交檢測，表明外源基因己插入到油菜基因組中，且多數(shù)為單拷貝插入。5.對T0代轉(zhuǎn)基因植株性狀、初花期、抗蟲性、