農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將天花粉蛋白基因?qū)肫咸训难芯?pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將天花粉蛋白基因?qū)肫咸训难芯啃彰褐荛L梅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：朱延明2002.5.1碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將天花粉蛋白基凼導(dǎo)入葡萄的研究東北農(nóng)業(yè)大學(xué)株生根數(shù)和平均根長均無顯著差異，都可作為生根培養(yǎng)基。f3)生根培養(yǎng)基中添加lg／L活性碳可防止根系褐化，使褐化率降低了874％。3優(yōu)化了遺傳轉(zhuǎn)化體系(I)通過3因素3水平正交試驗，探討了侵染受體、共培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)基pH值對遺傳轉(zhuǎn)化效

2、率的影響。結(jié)果表明，試驗組合：預(yù)培養(yǎng)的胚性愈傷、共培養(yǎng)4天、共培養(yǎng)基pH52為最優(yōu)試驗組合。這與本試驗中試驗組合8結(jié)果一致，其抗性愈傷比率最高，為319％。極差分析表明，各因素的主次順序為：共培養(yǎng)基pH值，共培養(yǎng)時間侵染受體。本試驗中最主要的影響因素是共培養(yǎng)基pH值。(2)確定了篩選抗生素的種類及濃度。在卡那霉素、G418、新霉素三種氨基糖苷類抗生素中，確定出新霉素為最適合選擇劑，液體篩選的最佳濃度為80mg／L，固體篩選的最佳濃度為1

3、00mg／L。(3)確定了最佳篩選方式。液體、固體相結(jié)合的篩選效果好于單純的固體篩選。胚性愈傷經(jīng)過液體篩選5天，過渡培養(yǎng)710天，再進行固體篩選，直至體細胞胚產(chǎn)生，這種篩選方法陽性植株率最高，為82％。4獲得了大量轉(zhuǎn)基因陽性植株以天花粉蛋白基因兩端序列合成的引物，對轉(zhuǎn)化后獲得的再生植株進行PCR檢測，結(jié)果轉(zhuǎn)pBrrCS獲得了132株再生植株，檢測了118株，有47株呈陽性，陽性植株比率為398％：轉(zhuǎn)pBTC得到了176株再生植株，檢測了