緩釋CGRP的殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥體外對HUVECs增殖的影響.pdf

1、目的:研究緩釋降鈣素基因相關肽（CGRP）的殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥（CGRP/Chitosan-Sr-CPC）的合成方法、形態(tài)結構、力學性能、釋放規(guī)律，及其對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)增殖的影響。
　　方法:(1)材料分組與制備:實驗分3組，CGRP/Chitosan-Sr-CPC為實驗組，摻鍶磷酸鈣骨水泥(Sr-CPC)（鍶和鈣的摩爾比是1∶9）、殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥(Chitosan-Sr-CPC)為對照組

2、。根據(jù)文獻方法制備Sr-CPC[1-2]，Sr-CPC作為多孔基體，采用加壓滲透和冷凍干燥法，吸附CGRP進入孔隙內(nèi)，然后再采用加壓滲透和冷凍干燥法，表面吸附殼聚糖(Chitosan)涂層，合成CGRP/Chitosan-Sr-CPC和Chitosan-Sr-CPC（未吸附CGRP）。(2)材料表征:掃描電鏡(SEM)、微計算機斷層掃描（micro-CT）、電子動靜態(tài)萬能材料試驗機觀察分析材料的表面結構、孔隙和力學性能，ELISA試劑盒

3、檢測探究模擬體液(SBF)中材料CGRP的釋放規(guī)律。(3)細胞實驗:免疫熒光法(IF)檢測觀察原代人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)表面CGRP受體表達的情況，骨架染色觀察材料表面的細胞粘附形態(tài)，CCK8法評估材料細胞毒性和刺激增殖能力， ELISA試劑盒檢測細胞分泌內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的水平。
　　結果:成功合成CGRP/Chitosan-Sr-CPC。材料表征:SEM鏡下觀察其表面均勻鋪展一層Chitosan涂層，在

4、SBF中第7天仍然存在。其中Sr-CPC基體在SBF中表面逐漸生成花叢樣、針尖樣物質（根據(jù)以往實驗和文獻資料，該物質為羥基磷灰石晶體）[1-2]。micro-CT檢測孔隙率為(4.06±1.19)％，孔徑多分布于45-82μm區(qū)間。與Sr-CPC相比，早期無明顯抗壓強度損失，且隨時間逐步增加。ELISA試劑盒檢測結果顯示CGRP可持續(xù)釋放至第5天，釋放速率隨時間逐漸減慢。細胞實驗:IF鏡下觀察HUVECs表達CGRP受體。從骨架染色圖片

5、可看出細胞在材料表面良好粘附。CCK8實驗結果說明，各組材料溶出物無細胞毒性，實驗組細胞增殖率明顯高于對照組(P＜0.05)。ELISA試劑盒檢測第2天培養(yǎng)液中細胞分泌VEGF水平，實驗組較對照組明顯升高(P＜0.05)。
　　結論:通過上述實驗方法合成的CGRP/Chitosan-Sr-CPC復合骨水泥，生物相容性良好，結構性能與Sr-CPC相比無明顯差異，同時體外早期可以持續(xù)釋放微量活性CGRP神經(jīng)肽，與細胞CGRP受體特異性