小鼠慢性酒精中毒腦神經(jīng)細胞APP和Aβ蛋白的表達.pdf

1、我國是一個人口大國，而且是一個老齡化進程最快、老齡人口眾多的國家。我國又是一個具有悠久歷史、多種多樣酒文化并存的國家。由于特殊的社會和歷史原因，酒精中毒的情況經(jīng)常發(fā)生。 慢性酒精中毒(chronic alcoholism)是以對乙醇的成癮為特征，由于經(jīng)常反復(fù)飲酒對乙醇產(chǎn)生耐受，當(dāng)其戒酒時出現(xiàn)脫癮(withdrawal)的神經(jīng)癥候。慢性酒精中毒引起神經(jīng)系統(tǒng)及其他器官的嚴重損害，其中神經(jīng)系統(tǒng)的損害最為嚴重。在法醫(yī)學(xué)實踐中，有時會遇到

2、酒精中毒的案例，常與交通事故、重要器官組織功能障礙等有關(guān)。 阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一種漸進性的神經(jīng)變性性疾病，表現(xiàn)為全面的認知功能障礙。主要病理學(xué)改變是由來源于淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)的β-淀粉樣肽(beta-amyloid，Aβ)構(gòu)成的淀粉樣斑塊和過度或異常磷酸化的Tau蛋白構(gòu)成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。 阿爾茨海默病的發(fā)病受很多因素影響

3、，包括環(huán)境因素、不良飲食習(xí)慣、藥物種類、中毒等。慢性酒精中毒是否會導(dǎo)致腦內(nèi)APP和Aβ蛋白的增多從而引發(fā)阿爾茨海默病的發(fā)生，目前尚缺乏系統(tǒng)的理論和實驗研究。 神經(jīng)細胞特異性烯醇化酶(Neuron-specific enolase，NSE)是神經(jīng)細胞的標(biāo)志性蛋白，特異性的存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞中，占腦內(nèi)全部可溶性蛋白的1.5％，神經(jīng)元損傷或壞死后NSE進入血液。 本研究在建立小鼠慢性酒精中毒的動物模型基礎(chǔ)上，應(yīng)用組織

4、病理學(xué)和免疫組織化學(xué)等技術(shù)，研究小鼠慢性酒精中毒后，腦組織神經(jīng)細胞中APP和Aβ的表達，并應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件對觀察到的實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，探討慢性酒精中毒腦神經(jīng)細胞中APP和Aβ的含量變化以及與阿爾茨海默病發(fā)病之間的因果關(guān)系。 材料和方法： 一、動物模型的建立及分組 雄性健康9周齡昆明小鼠42只，隨機分為30天組，60天組，每組又分10％酒精組、20％酒精組和對照組，其中對照組各5只，10％酒精組各8只，2

5、0％酒精組各8只。 實驗組將無水乙醇(色譜純)用飲用礦泉水配成濃度為10％、20％酒精溶液作為實驗小鼠飲用水，對照組采用飲用礦泉水代替。實驗結(jié)束后，直接斷頭處死動物，迅速提取小鼠腦組織，4％多聚甲醛/PBS pH7.4固定液固定，石蠟包埋、制片。 二、實驗方法 (1)應(yīng)用HE染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細胞的病理組織學(xué)形態(tài)變化； (2)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細胞內(nèi)神經(jīng)元特

6、異性烯醇化酶表達的變化； (3)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察小鼠慢性酒精中毒后腦神經(jīng)細胞內(nèi)APP和Aβ表達情況； (4)采用Motic Images Advanced3.2圖像分析系統(tǒng)計算免疫組織化學(xué)染色陽性細胞數(shù)和細胞內(nèi)陽性反應(yīng)產(chǎn)物的光密度； (5)應(yīng)用SPSS統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 實驗結(jié)果： (1)各實驗組小鼠出現(xiàn)明顯的慢性中毒表現(xiàn)，且體重明顯下降； (2) HE染色見慢性

7、酒精中毒的小鼠腦組織水腫，神經(jīng)細胞內(nèi)尼氏體消失或邊聚，神經(jīng)細胞周圍間隙增寬； (3)神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色見該酶蛋白含量增加； (4)對照組可見少量APP免疫組織化學(xué)染色陽性的神經(jīng)細胞，染色產(chǎn)物分布于細胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色。實驗組APP染色陽性細胞明顯增多，表達增強，且不同濃度不同時間段陽性表達強度不同。實驗組腦神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)明顯的Aβ陽性染色產(chǎn)物，且高濃度長時間給藥組陽性細胞數(shù)明顯增多，表達增強。使用M

8、otic Image Advanced3.2圖像分析系統(tǒng)計算各組平均積分光密度，并采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)實驗組和對照組間有明顯差異。 結(jié)論： 1.慢性酒精中毒可引起實驗小鼠腦神經(jīng)細胞呈退行性改變； 2.慢性酒精中毒可引起實驗小鼠腦神經(jīng)細胞神經(jīng)元特異性烯醇化酶含量增多和分布異常； 3.慢性酒精中毒可引起實驗小鼠腦神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)產(chǎn)生Aβ蛋白，且APP蛋白的表達明顯增強。 4.慢性酒精中毒可